DNA 擴(kuò)增試劑盒說明書

【試劑名稱】 DNA 擴(kuò)增試劑盒

【 目 錄 號(hào) 】 051011M

【產(chǎn)品保存】 -18~-25℃，有效期為 12 個(gè)月

【包裝規(guī)格】 48 測(cè)試

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】本產(chǎn)品為 DNA 擴(kuò)增試劑盒，可用于人源性、動(dòng)植物源性病原體及其他細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等核酸的快速擴(kuò)增。本試劑

盒通過 Bst 聚合酶、四種核苷酸單體（dNTPs）、引物等成分的作用，在恒溫條件下（60～65℃）快速、特異地完成核酸擴(kuò)增，通過

儀器判讀結(jié)果。

【主要組成成份】

使用指南實(shí)時(shí)熒光法

【適用儀器】ZYD-S1，熒光 PCR 儀（ABI 7500，CFX 96，Mx 3005P，LineGene 9600），Deaou-308c，Genie II 等擴(kuò)增儀。

【檢驗(yàn)方法】

1． 反應(yīng)體系的配制。（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行，冰上操作）

推薦擴(kuò)增反應(yīng)體系（見表 1，以 25 μl 為例）

表 1 反應(yīng)體系參考

上述試劑混勻后，加入一滴密封液，混勻離心，蓋緊管蓋。

2．LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)。（在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

將上述反應(yīng)管放入 60～65℃的擴(kuò)增儀內(nèi)，反應(yīng) 20～60 min 后取出反應(yīng)管（反應(yīng)溫度及時(shí)間根據(jù)具體情況而定；試劑盒對(duì)照品

最佳擴(kuò)增溫度為 63℃，最佳反應(yīng)時(shí)間為 60 min）。

使用熒光 PCR 儀，請(qǐng)選用 FAM 通道，反應(yīng)程序設(shè)置可參考圖 1，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個(gè)循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收

集熒光信號(hào)。使用其他儀器請(qǐng)按照儀器說明書操作。

圖 1  熒光 PCR 儀反應(yīng)程序設(shè)置圖

3．結(jié)果檢測(cè)

若有“S”型擴(kuò)增曲線，則判斷為陽性（有核酸擴(kuò)增），若無“S”型擴(kuò)增曲線，則判斷為陰性（無核酸擴(kuò)增），見圖 2。

圖 2 檢測(cè)結(jié)果示意圖【注意事項(xiàng)】

實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，建議使用帶濾芯的吸頭。

試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議使用前離心 30 秒。

實(shí)驗(yàn)請(qǐng)按實(shí)驗(yàn)室區(qū)操作，試劑配制等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書的要求在冰上操作。

陽性對(duì)照品最適擴(kuò)增溫度為 63℃，最適反應(yīng)時(shí)間為 60 min，提高或降低反應(yīng)溫度將影響擴(kuò)增效率，延長擴(kuò)增時(shí)間可能會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。

反應(yīng)結(jié)束后，開蓋易造成氣溶膠污染，切忌開蓋。

不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，請(qǐng)?jiān)谟行�期�?nèi)使用試劑盒。

本試劑盒僅供科研使用，請(qǐng)勿用于其他用途。