沙門氏菌核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/P>

致病菌檢測(cè)系列基于獨(dú)特的恒溫?zé)晒鈾z測(cè)技術(shù)，可針對(duì)食品、飼料等樣品中的致病微生物的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，

儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，自動(dòng)判讀結(jié)果。本產(chǎn)品用于沙門氏菌的檢測(cè)，檢出限為 10³  CFU/mL（使用旋達(dá)細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒提取 1 ml 10³ CFU/ml 增菌液的細(xì)菌基因組 DNA 作為模板）。

◆ 產(chǎn)品組成（ 48 測(cè)試）

◆ 適用儀器

ZYD-S1、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒溫?zé)晒鈾z測(cè)儀， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96 等熒光 PCR 儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌 1.5mL 或 2.0mL 離心管；②滅菌 0.2mL PCR 管或八聯(lián)管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；⑤離心機(jī)；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴。

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，試驗(yàn)產(chǎn)生的所有廢棄物及時(shí)處理。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求在冰上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30 秒，

并按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染，禁止開(kāi)蓋。

6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB 4789.4-2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》中的 5.1 或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，對(duì)樣品進(jìn)行前增菌，制備的菌液保存待用。稱取 25 g（mL）樣品放入盛有 225 mL BPW 的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以 8000 r/min～10000 r/min 均質(zhì) 1 min～2 min，或置于盛有 225 mL BPW 的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min～2 min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定 pH 值，用 1 mol/mL 無(wú)菌 NaOH 或 HCl 調(diào) pH 至 6.8 ±0.2。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至 500 mL 錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 8 h～18 h。

如為冷凍產(chǎn)品，應(yīng)在 45 ℃以下不超過(guò) 15 min，或 2 ℃～5 ℃不超過(guò) 18 h 解凍。詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

將試劑完全解凍，各組分離心 30s。

1. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）：

若有 N 個(gè)待檢樣品，則參照下表，按照 N+2 個(gè)數(shù)量計(jì)算各組分用量（N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)陰性對(duì)照+1 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），將反應(yīng)液置于 1.5mL 或者 2.0mL 離心管中，漩渦混勻，離心 30 秒，分裝于 0.2mL PCR 管中，并向每管加入 1 滴 C-I（約

   20μL）。

2．模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用試劑配套細(xì)菌組 DNA 提取系列產(chǎn)品，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書。

3．添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

在步驟 1 中已含有反應(yīng)液的 PCR 管中加入 2μL 模板，順序?yàn)?NG-I、待測(cè)樣品模板、PG-Sal-I。渦旋混勻30s，離心 1min，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

63℃條件下反應(yīng) 30min。

若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個(gè)循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號(hào)，30 個(gè)循環(huán)。

其他儀器請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置。

◆ 結(jié)果判定

儀器自動(dòng)判定結(jié)果，若顯示“陽(yáng)性”，則樣品中含有沙門氏菌；若顯示“陰性”，則樣品中不含有沙門氏菌或含量低于檢測(cè)限。

• NG 反應(yīng)管結(jié)果顯示“陰性”，PG 反應(yīng)管結(jié)果顯示“陽(yáng)性”，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效，請(qǐng)與技術(shù)支持人員聯(lián)系。