與LC-MS儀器對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果符合率100%，批間差異小于0.1%，試劑盒穩(wěn)定高，抗干擾力強(qiáng)。

按照競(jìng)爭(zhēng)性ELISA操作過程，對(duì)不同稀釋度的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測(cè)定，以各孔平均OD值與對(duì)照組的OD值比值的logit函數(shù)為縱坐標(biāo)，以不同濃度河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖所示：線性回歸方程為y＝-1.9695x＋3.3899，R²＝0.9902；線性范圍為5-500 ng/mL，最低檢測(cè)限為5 ng/mL。

  

添加250 ng和500 ng的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品的1 g河豚魚魚肉中，通過競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)結(jié)果如表所示：添加250 ng標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，回收率為159%，添加500 ng標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，回收率為108%。產(chǎn)品回收率偏高，我們分析可能是由于洗板次數(shù)太多，導(dǎo)致少量的抗體抗原脫離，或者是由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間偏長，抗體的效價(jià)減弱引起。產(chǎn)品回收率偏高，不影響檢測(cè)靈敏度，由于產(chǎn)品檢測(cè)限較低(5 ng/mL),所以該產(chǎn)品可以滿足日常對(duì)河豚魚的檢測(cè)工作要求。

 

對(duì)濃度為10、50、100、150 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表所示：10-150 ng/mL 4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度變異系數(shù)為1.93-3.77%，平均變異系數(shù)為2.76%。

 

變異系數(shù)CV %=（標(biāo)準(zhǔn)偏差SD /平均值Mean）×100%

 

 

方法依據(jù)：GBT 5009.206-2007 鮮河豚魚中河豚毒素的測(cè)定

 

計(jì)算公式：X＝C×D×V/m

         X:樣品中河豚毒素含量，單位為微克每千克(μg/kg)

         C:酶標(biāo)板上測(cè)的河豚毒素含量，單位為納克每毫升（ng/mL）

         D:樣品稀釋倍數(shù)

         V:提取溶液的定容體積，單位為毫升（mL）

         m:檢測(cè)樣品的質(zhì)量，單位為克（g）

 

關(guān)于河豚魚的毒性,一般分為4個(gè)毒力等級(jí):毒性高于1000 MU/g為劇毒級(jí);介于100 MU/g～1000 MU/g之間為強(qiáng)毒級(jí);介于10 MU/g～100 MU/g之間為弱毒級(jí);低于10 MU/g為無毒級(jí)(無毒級(jí)中使小鼠致死的情況可視為微毒級(jí))。據(jù)張理對(duì)鼠單位的定義 (1 MU=0.22 μg)。

 

根據(jù)上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程(y=a×x-b)。其中 a、b為系數(shù)，y為抑制率(A0-A /A0%)，x為Log(100*河豚毒素濃度)。根據(jù)樣品的OD₄₉₀ (A)值計(jì)算抑制率,再根據(jù)公式計(jì)算出河豚毒素的濃度。結(jié)果上表所示：河豚毒素在浙江與海南省常見河豚魚的種類分布差異顯著，菊黃東方鲀未檢測(cè)出毒性，屬于無毒級(jí)別；雙斑東方鲀雖有檢測(cè)出毒性但也屬于無毒級(jí)別，其中雄性雙斑東方鲀的脾臟和胃毒力高于雌性；野生月腹刺鲀的毒力明顯高于養(yǎng)殖品種。