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重組CHO細(xì)胞分離及蛋白收獲技術(shù)介紹

瀏覽次數(shù):3639 發(fā)布日期:2017-10-12  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

簡(jiǎn)介:

現(xiàn)今,通過(guò)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),新一代生物制藥得到了前所未有的發(fā)展。本文主要介紹通過(guò)中空纖維微孔過(guò)濾,以分離哺乳動(dòng)物分泌蛋白的過(guò)程。起始濃度為2×105 cell/ml,細(xì)胞外蛋白產(chǎn)物是一種與白介素-2相似的10kD淋巴因子,是一種潛在的腫瘤治療藥物。該應(yīng)用需要去除細(xì)胞和顆粒,而不裂解細(xì)胞,同時(shí)達(dá)到較高的蛋白回收率。由于產(chǎn)品為熱不穩(wěn)定,所以處理時(shí)間非常關(guān)鍵。

KrosFlo中空纖維過(guò)濾組件

工藝條件:

鑒于細(xì)胞濃度較低,600L的處理量通常只需要膜表面積為2-3m2 的過(guò)濾器。但該處理要求的時(shí)間較短,所以平行安裝了2個(gè)0.2 µm 截留分子量的KrosFlo組件,每個(gè)膜表面積為3.3 m。預(yù)計(jì)循環(huán)速度為70 L/min。過(guò)濾器進(jìn)口壓力固定為5 psig。當(dāng)過(guò)濾量達(dá)到處理量30%時(shí),在過(guò)濾器出口施加10psig背壓,即將過(guò)濾器進(jìn)口壓力上升為15psig左右。除了小的調(diào)整之外,所有條件在處理過(guò)程中保持不變。

結(jié)果:

600L 樣品處理于65min完成過(guò)濾。穩(wěn)態(tài)流速為85 L/m2hr。過(guò)濾量與時(shí)間基本呈線性關(guān)系。為最大限度提高過(guò)濾量,處理過(guò)程中對(duì)壓力和流量稍做優(yōu)化。正如預(yù)期,過(guò)濾器的流率隨時(shí)間稍有衰減,但處理器的產(chǎn)物回收率仍可達(dá)到94%甚至更高。

通量 & 過(guò)濾量 vs. 時(shí)間

討論:

該處理中,目的蛋白會(huì)與聚砜膜緊密結(jié)合,但從經(jīng)濟(jì)上考慮,又需要有較高的產(chǎn)率。KrosFlo纖維膜具有良好的蛋白通道,作為一次性使用組件,可從工藝運(yùn)行開(kāi)始到結(jié)束保持始終如一的膜特性,同時(shí)消除了膜清洗所需的成本和時(shí)間,并避免污染風(fēng)險(xiǎn)。瑞普利金(原仕必純)膜組件具有多種不同的表面積規(guī)格,方便工藝處理時(shí)間的優(yōu)化。數(shù)據(jù)顯示,使用微孔中空纖維錯(cuò)流過(guò)濾,可同時(shí)實(shí)現(xiàn)熱敏感產(chǎn)物的快速過(guò)濾和高回收量。


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