離心機是利用離心力對混合液(含有固形物)進行分離和沉淀的一種專用儀器。實驗室常用電動離心機有低速、高速離心機和低速、高速冷凍離心機,以及超速分析、制備兩用冷凍離心機等多種型號。其中以低速(包括大容量)離心機和高速冷凍離心機應用最為廣泛,是生化實驗室用來分離制備生物大分子必不可少的重要工具。在實驗過程中,欲使沉淀與母液分開,常使用過濾和離心兩種方法。但在下述情況下,使用離心方法效果較好。
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、凇〕恋眍w粒小,容易透過濾紙。
③ 沉淀量過多而疏松。
、堋〕恋砹亢苌,需要定量測定。或母液量很少,分離時應減少損失。
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⑥ 一般膠體溶液。
1.電動離心機的基本結構和性能
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這類離心機結構較簡單,可分小型迷你離心機臺式和落地式兩類,配有驅動電機、調速器、定時器等裝置,操作方便。低速離心機其轉速一般不超過4000rpm,臺式高速離心機最大轉速可達18000rpm。
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轉速一般不超過4000rpm,最大容量為2—4L,是實驗室最常用于大量初級分離提取生物大分子、沉淀物等。其轉頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種,離心管有硬質玻璃、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號。離心機裝配有驅動電機、定時器、調整器(速度指示)和制冷系統(tǒng)(溫度可調范圍為-20—+40℃),可根據(jù)離心物質所需,更換不同容量和不同型號轉速的轉頭。
、邸高速冷凍離心機
轉速可達20000rpm以上,除具有低速冷凍離心機的性能和結構外,高速離心機所用角式轉頭均用鈦合金和鋁合金制成。離心管為具蓋聚乙烯硬塑料制品。這類離心機多用于收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。
④ 超速離心機
轉速可達50000rpm以上,能使亞細胞器分級分離,并用于蛋白質、核酸分子量的測定等。其轉頭為高強度鈦合金制成,可根據(jù)需要更換不同容量和不同型號的轉速轉頭。超速離心機驅動電機有兩種,一種為調頻電機直接升速,另一種為通過變速齒輪箱升速。為了防止驅動電機在高速運轉中產(chǎn)熱,裝有冷卻驅動電機系統(tǒng)(風冷、水冷),限速器、記時器、轉速記錄器等。此外,超速離心機還裝配有抽真空系統(tǒng)。
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。ǎ保 通常離心機都會有登記表,請在使用前確實登記使用者、轉陀、轉速、時間 。
(2) 離心管一定要平衡好,放入離心陀時也要注意位置平衡。絕對不要超過離心機或離心陀的最高限轉速。
(3) 一定要在達到預設轉速后,才能離開離心機;若有任何異狀,要立刻停機。
(4) 通常聽聲音即可得知離心狀況是否正常,也可注意離心機的震動情形。
(5) 使用硫酸銨等高鹽溶液樣本后,一定要把離心陀洗干凈,也要清理離心機轉艙。
(6) 超高速離心機則因轉速極高,也更加復雜,需要另外的專門訓練才可使用。
3.問題與檢討
(1) 高速以上的離心機為何要冷凍或者抽真空?
(2) 你已經(jīng)很小心地把兩只樣本離心管平衡好,但開動離心機后,還是發(fā)生不平衡狀況,停機后取出再秤一次,發(fā)現(xiàn)兩只離心管還是平衡的,請問為何會發(fā)生不平衡?
(3) 離心陀一般分成懸籃式swing bucket及角型 angular兩大類,使用上有何差別?
(4) 一般論文中記載的離心條件,有人記錄轉速如8,000rpm,有人記錄離心重力如10,000g,二者有何不同?何者較為適當?
4.使用步驟,通常使用離心機前都要登記,請養(yǎng)成登記習慣。
。ǎ保 設定使用溫度 通常為4℃ 后,先把離心陀放入離心艙中,注意離心陀要卡好軸心;關上艙門,離心艙的溫度開始下降,預冷時間要充足。
(2) 把樣本裝入適當?shù)碾x心管,雙雙用天平平衡重量,蓋上離心管蓋子并旋緊。
◆ 注意離心管只裝七成滿,雖然加有蓋子,但也可能因離心力太強而外泄。
◆ 大部分離心管都附有蓋子,注意離心管的蓋子也要一起平衡。
◆ 離心管通常都會放在碎冰上,注意取出平衡時,要把碎冰的液體擦拭干凈。
◆ 落單的離心管要用另一只裝有清水的離心管平衡。
。ǎ常┌哑胶夂玫碾x心管對稱地放入離心陀中,蓋上離心陀的蓋子,注意有無旋緊。
◆ 若離心陀的蓋子沒旋緊,離心時會掉出來,造成很大的傷害!
(4)關上離心機艙門,在儀表板上調好所要的轉速與時間例如 8,000rpm 30min 。
◆ 注意所用轉速絕對不能超過離心陀的限定,最高轉速通常寫在離心陀上面,例如TGL-20M的最高轉速為20,000rpm,但若離心機太老舊,必須往下調降。
◆ 轉速與時間設定盡量不要太高,例如能使用7,000rpm 者就不要用 8,000rpm。
(5) 確定所有步驟無誤后,按Start鈕開動,離心機漸漸加速,此時要密切監(jiān)控。
◆ 有些老式的時間轉鈕,設定5min 以下時,要先轉過10min 再轉回5min。
◆ 按 Start 的按鈕時,按住時間不能太短,請持續(xù)按約一秒鐘后才松開。
◆ 開始加速的時候最危險,若發(fā)現(xiàn)聲音不對,或產(chǎn)生大震動,請立刻按 Stop。
(6) 等到離心達到所要的轉速后,確定一切正常才可離去。
(7) 完成離心時,要等離心陀完全靜止后,才能打開艙門;請盡快取出離心管,先觀察離心管是否完全,以及沉淀的位置,盡速把上清倒出,小心不要把沉淀弄混濁。
◆ 不管所要的是上清或沉淀,請取用干凈的燒杯收集上清,以免有失誤。
◆ 傾倒上清要很小心,以免把沉淀一起倒出來;若不慎混在一起,就要重來一次。
◆ 若離心管有漏,要找出原因,并且立刻清理離心陀或離心艙。
(8) 在兩次離心之間的空檔,不需取出離心陀,但蓋上艙門,勿讓熱空氣流入離心艙。
(9) 全部使用完畢后,取出離心陀清理,可以用自來水沖洗,并且倒放晾干。離心艙門要打開,等結冰融化后,再稍加擦拭及清理,若有液體漏出,要用清水洗之。也要回頭檢查平衡離心管的天平以及桌面,很容易弄臟,要仔細清理干凈才離開。
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