YIJI藍(lán)色熒光細(xì)胞核染色分析試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI藍(lán)色熒光細(xì)胞核染色分析試劑是一種旨在通過(guò)使用熒光染料DAPI與細(xì)胞核DNA特異性結(jié)合，并發(fā)出熒光檢測(cè)信號(hào)，用于分析和觀察細(xì)胞核形態(tài)或DNA含量以及雙重染色或重疊染色定位的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞核（動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等）的觀察。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

作為細(xì)胞DNA染色劑之一的4,6-二咪基－4-聯(lián)苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團(tuán)的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發(fā)波長(zhǎng)356nm，使得DAPI成為一種常用的熒光檢測(cè)信號(hào)，并作為雙重染色或重疊染色的主要染色劑之一。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI清理液（Reagent A）     200毫升

YIJI固定液（Reagent B） 50毫升

YIJI擴(kuò)張液（Reagent C） 50毫升

YIJI染色液（Reagent D） 20毫升

YIJI抗淬滅劑（Reagent E）  5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)            1份

保存方式

保存YIJI固定液（Reagent B）、YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬滅劑（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬滅劑（Reagent E）避免光照；有效保證6月

用戶自備

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的操作

蓋玻片：用于染色后封片

熒光顯微鏡：用于觀察細(xì)胞核DNA染色

實(shí)驗(yàn)步驟

• 貼壁細(xì)胞染色
• 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)24孔板的待測(cè)細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá)70％

（注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見(jiàn)注意事項(xiàng)6）

• 小心抽掉細(xì)胞培養(yǎng)液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心沿著孔壁加入500微升－20℃預(yù)冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心沿著孔壁加入500微升YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A），空氣中晾干

（注意：由此步驟開(kāi)始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長(zhǎng)350nm，散發(fā)波長(zhǎng)460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）

懸浮細(xì)胞染色

• 將懸浮細(xì)胞（1 X 10⁶細(xì)胞）移入到1.5毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 輕輕指彈，松動(dòng)細(xì)胞顆粒群
• 一滴一滴加入500微升－20℃預(yù)冷的YIJI固定液（Reagent B），混勻細(xì)胞顆粒群
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 在室溫下孵育5分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），混勻細(xì)胞顆粒群
• 在室溫下孵育5分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）

（注意：由此步驟開(kāi)始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），混勻細(xì)胞顆粒群
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入400微升 YIJI清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉400微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 移出5微升到載玻片上，放上蓋玻片
• 即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長(zhǎng)350nm，散發(fā)波長(zhǎng)460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）

載玻片染色

• 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞載玻片
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心加上100微升－20℃預(yù)冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆蓋載玻片表面
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升YIJI通透液（Reagent C），覆蓋載玻片表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉100微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），空氣中晾干
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14一次

（注意：由此步驟開(kāi)始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加上100微升YIJI染色液（Reagent D），覆蓋載玻片表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽掉100微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上50微升 YIJI抗淬滅液（Reagent E）
• 蓋上蓋玻片
• 即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長(zhǎng)350nm，散發(fā)波長(zhǎng)460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為100次（4個(gè)24孔培養(yǎng)板）和200次（載玻片）操作規(guī)格
• 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
• YIJI染色液（Reagent D）為半通透性染料
• 操作時(shí)須戴手套
• 操作時(shí)，避免污染母液
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整試劑溶液：

• 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞脫離處理后染色
• 本公司提供系列細(xì)胞核染色分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰