英國(guó)TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英國(guó)劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過(guò)突破等溫DNA擴(kuò)增，開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增專(zhuān)利技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。(/)

What is RPA?

　　概念：重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應(yīng)溫度在37°C左右。

　　RPA技術(shù)原理：

　　重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非�？�，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。

　　Who uses RPA?

　　以此為基礎(chǔ)的TwistAmp® 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測(cè)該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

 

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	儲(chǔ)存	檢測(cè)方法
TwistAmp Basic	TABAS03KIT	96次	-20℃	終點(diǎn)檢測(cè)：如凝膠電泳

 

 

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	儲(chǔ)存	檢測(cè)方法
TwistAmp exo	TAEXO02KIT	96次	-20℃	實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	規(guī)格	儲(chǔ)存	檢測(cè)方法
TwistAmp nfo	TANFO02KIT	96次	-20℃	測(cè)流層析試紙檢測(cè)

   FAQs

　　1、RPA技術(shù)有哪些特性:

　　RPA的特性：快速檢測(cè) 15min進(jìn)行單分子檢測(cè)試驗(yàn)， 簡(jiǎn)易包裝 穩(wěn)定凍干形式試劑. 無(wú)需熱循環(huán)過(guò)程 擺脫任何儀器束縛. 便攜 設(shè)備要求低，貧瘠條件亦能 完成檢測(cè)

　 2、RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎

　　可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過(guò)，多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì)，以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)最好不要超標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測(cè)多個(gè)擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。

　　3、能否對(duì)模板進(jìn)行定量

　　可以。擴(kuò)增子達(dá)到可檢出水平的時(shí)間，依賴(lài)于反應(yīng)起始時(shí)的模板量。初始模板的拷貝越多，擴(kuò)增子就越快達(dá)到可檢出水平。不過(guò)，這種定量需要精心的實(shí)驗(yàn)安排，確保對(duì)照反應(yīng)是同時(shí)開(kāi)始的。舉例來(lái)說(shuō)，可以利用鎂離子的添加時(shí)間進(jìn)行控制。因?yàn)殒V離子一旦進(jìn)入體系，RPA反應(yīng)就會(huì)開(kāi)始。

　　此外，較慢的擴(kuò)增過(guò)程有助于更精確的定量。我們可以通過(guò)調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計(jì)來(lái)減慢RPA的反應(yīng)速度。

　　4、能否進(jìn)行熒光終點(diǎn)分析

　　可以。這樣比較的是反應(yīng)開(kāi)始時(shí)的熒光和反應(yīng)結(jié)束時(shí)的熒光，熒光增強(qiáng)意味著發(fā)生了擴(kuò)增。

　　5、能否支持生物素或熒光標(biāo)記的寡核苷酸

　　支持。在RPA反應(yīng)中，連有生物素或熒光團(tuán)的引物與未修飾的引物表現(xiàn)差不多。據(jù)悉還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何差異。

　　6、跑膠前需要回收RPA產(chǎn)物嗎

　　需要。RPA反應(yīng)中的物質(zhì)會(huì)干擾瓊脂糖電泳，如果不進(jìn)行產(chǎn)物回收，跑出來(lái)的帶會(huì)出現(xiàn)拖尾。

　　恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

　　取代PCR的核酸擴(kuò)增術(shù) ，

　　領(lǐng)域：廣泛應(yīng)用于臨床診斷，食品安全檢測(cè)，動(dòng)物疾病檢測(cè)等領(lǐng)域

　　特點(diǎn)：快速，高效，特異，無(wú)需專(zhuān)門(mén)設(shè)備

　　RPA與LAMP對(duì)比

　　LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法的特征是針對(duì)目標(biāo)DNA鏈上的六個(gè)區(qū)段設(shè)計(jì)四個(gè)不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60～65℃)、經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。

　　RPA：主要依賴(lài)于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。

　　重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。

 

	LAMP	RPA
開(kāi)發(fā)公司	日本榮研生物	英國(guó)TwistDx	——
酶組分	鏈置換DNA聚合酶	重組酶;單鏈結(jié)合蛋白;鏈置換DNA聚合酶	——
最適反應(yīng)溫度	60-65℃	37-40℃	Win!
反應(yīng)時(shí)間	40min左右	15min左右	Win!
引物數(shù)	2對(duì)	1對(duì)	Win!
狀態(tài)	液體	凍干	Win!
檢測(cè)方式	目視;比濁檢測(cè)	電泳;測(cè)流試紙;探針?lè)�熒光定�?/P>	——
可否用于下游應(yīng)用	否	否	——
儀器	水浴鍋或恒溫箱	無(wú)需任何儀器	Win!
國(guó)產(chǎn)化，價(jià)格低	價(jià)格相對(duì)較高	——
硬性缺點(diǎn)	氣溶膠，假陽(yáng)性	終端檢測(cè)相對(duì)復(fù)雜，價(jià)格高	——

 

新一代RPA恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)儀T8

　　新一代RPA恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)儀T8--敏如紅隼

　　截止到11月30日， 凡在我司購(gòu)買(mǎi)者均享有9折優(yōu)惠！

　　新一代RPA恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)儀T8特點(diǎn)：小巧的的，強(qiáng)效的，精準(zhǔn)的

 

　　紅隼具有紫外的視覺(jué)，它們?cè)?5m的高空可以看在獵物的尿跡。

　　T8 等溫儀介紹：

　　1、小巧便攜

　    2、強(qiáng)效的FAM和ROX通道作為標(biāo)準(zhǔn)

　    3、精確且實(shí)時(shí)的屏幕輸出

　    4、自動(dòng)磁力混勻

　    5、無(wú)需電腦

 

　　詳情請(qǐng)見(jiàn)：/products/yqhc/64.html

　　可選配件（需另購(gòu)）：外部電源(/products/yqhc/65.html)，手提箱(/products/yqhc/66.html)

 

RPA核酸檢測(cè)系列之RPA最新應(yīng)用

 

RPA核酸檢測(cè)系列之RPA最新應(yīng)用

RPA核酸檢測(cè)系列之RPA最新應(yīng)用：

犬內(nèi)臟利什曼病POCT檢測(cè)

A Novel Molecular Test to Diagnose Canine Visceral Leishmaniasis at the Point of Care

A Castellanos-Gonzalez, O.A. Saldarriaga, L. Tartaglino, R. Gacek, E. Temple, H. Sparks, P. C. Melby, B.L Travi

Prduct used：TwistAmp nfo kit

Paper Link：

http://www.ajtmh.org/content/early/2015/07/30/ajtmh.15-0145.abstract

RPA用于全基因組和基因特異性DNA甲基化檢測(cè)

Colorimetric detection of both total genomic and loci-specific DNA methylation from limited DNA inputs

Eugene J.H. Wee, Thu Ha Ngo, Matt Trau

Prduct used：TwistAmp basic kit

Paper Link：

http://www.clinicalepigeneticsjournal.com/content/7/1/65

 

埃及血吸蟲(chóng)病RPA擴(kuò)增及寡色譜測(cè)流試紙檢測(cè)

Isothermal Recombinase Polymerase amplification (RPA) of Schistosoma haematobium DNA and oligochromatographic lateral flow detection

A. Rosser, D. Rollinson, M. Forrest, B. L Webster

Prduct used：TwistAmp basic kit；TwistAmp nfo kit

Paper Link：

http://www.parasitesandvectors.com/content/pdf/s13071-015-1055-3.pdf

更多RPA相關(guān)應(yīng)用請(qǐng)見(jiàn)：

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產(chǎn)品詳情： 

 

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	描述
TABAS03kit	TwistAmp Basic	用于RPA快速擴(kuò)增
TABSRT01KIT	TwistAmp Basic RT	用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，CDNA快速擴(kuò)增
TANFO02_T	TwistAmp nfo	用于末端檢測(cè)，檢測(cè)DNA復(fù)制反應(yīng)
TAFPG01kit_T	TwistAmp fpg	用于real-time探針檢測(cè)
TAEXO02kit_T	TwistAmp exo	用于real-time探針檢測(cè)
TAEXORT02kit_T	TwistAmp exo RT*	熒光檢測(cè)探針?lè)≧T-RPA
TAUST01kit	TwistAmp exo +Listeriam	用于李斯特菌檢測(cè)
TAEXOCAMP01KIT	TwistAmp exo +Campylobacter	用于彎曲菌檢測(cè)
TFSAL01KIT_T	TwistFlow Salmonella	用于沙門(mén)螺桿菌檢測(cè)
TGSAL01KIT_T	TwistGlow Salmonella	用于沙門(mén)螺桿菌檢測(cè)
TFRED01KIT_T	TwistFlow RedSnapper	用于紅鯛魚(yú)基因檢測(cè)