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正常人外周血白細(xì)胞的分離實(shí)驗(yàn)方法

瀏覽次數(shù):3092 發(fā)布日期:2017-3-16  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、自然沉降法 
正常人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000~1000:1,兩類細(xì)胞的沉降速度不同,進(jìn)行正常人外周血白細(xì)胞分離。
 
1、試劑及配制

1)無Ca2+、Mg2+ Hank’s液。
2)含10%~20% 滅活小牛血清Hank’s液。
 
2、操作方法
1)取靜脈血2ml,放入加有抗凝劑的試管中,輕輕混勻。
2)將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30~60min,待紅細(xì)胞自然沉降。此時可見試管中的懸液分3層,上層為淡黃色血漿,底層為紅細(xì)胞,在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層(正常人外周血白細(xì)胞)。
3) 用毛細(xì)管吸取位于紅細(xì)胞層上面的富含白細(xì)胞的細(xì)胞懸液,移入另一試管中;
4) 加入無Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處,混勻,以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min,棄上清,同法在洗滌兩次。
5)沉淀細(xì)胞用適量10%~20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,計數(shù),配成所需的細(xì)胞濃度的懸液,一般常用2×106/min。
 
二、加速紅細(xì)胞沉降法 
利用高分子量的聚合物促使紅細(xì)胞凝聚成串錢狀,從而加速紅細(xì)胞沉降,使之與白細(xì)胞分離。常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及甲基纖維素等。
 
1、試劑及配制
1)3%明膠(粘度為25泊以上):選取優(yōu)質(zhì)明膠,用生理鹽水配成3%溶液,置沸水浴加熱溶解,分裝,高壓蒸汽滅菌8磅15~20min。
2)6%右旋糖酐(分子量200~400KD):用生理鹽水配制。
 
2、操作方法
1)取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水或6%右旋糖酐溶液中,混勻。
2)將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30~60min,利用明膠與紅細(xì)胞的粘合作用,促使紅細(xì)胞快速下沉,而白細(xì)胞留在明膠溶液中。
3)用毛細(xì)吸管吸取富含白細(xì)胞的上層液,移入另一試管中。
4)加入無Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處,混勻,以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min,棄上清,同法在洗滌兩次。
5)沉淀細(xì)胞用適量10%~20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,計數(shù),配成所需的細(xì)胞濃度的懸液,一般常用2×106/min。
 
三、正常成人白細(xì)胞正常值
1、白細(xì)胞數(shù)值
成年人外周血液中正常的白細(xì)胞數(shù)值是4~10×10g/L,如果少于4×10g/L為白細(xì)胞減少,超過10×10g/L及為白細(xì)胞增多。
正常值范圍:(單位為×109個/L)
(1)成人為4.0-10.0
(2)新生兒為15-20
(3)6個月到2歲為11-12
(4)4到14歲為8
 
2、白細(xì)胞分類計數(shù)
在外周血液中可以看到的白細(xì)胞,一般可分:中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等五種。其中以中性粒細(xì)胞最多,其次為淋巴細(xì)胞,其他的白細(xì)胞很少。所謂白細(xì)胞分類計數(shù)就是計算各種白細(xì)胞在它的總數(shù)中所占的百分比數(shù)。
正常值為:
中性粒細(xì)胞:50~70%
嗜酸性粒細(xì)胞:0.5~5%
嗜堿性粒細(xì)胞:0~1%
淋巴細(xì)胞:20~40%
單核細(xì)胞:1~8%
來源:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:027-87490190
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