D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍綠色的光(560nm)，當?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、細菌、哺乳動物細胞的常用報告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至0.02 pg 水平的熒光素酶。

D-熒光素鉀鹽可使luc標記基因和熒光素酶融合蛋白在活細胞、組織和生物體的表達成像，廣泛應用于報告基因的分析、免疫測定和衛(wèi)生監(jiān)控。

化學名稱：4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt
CAS  號：115144-35-9
分子式：C11H7N2O3S2K
分子量：318.42 g/mol
純度：99.7 %（HPLC）

應用

體外熒光檢測：熒光素的配制

試劑：
D-熒光素鉀鹽（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
分子生物學級水

培養(yǎng)基

操作步驟：
1、 用分子生物學級水準備一個30mg/L（200×）的儲存液。
a． 反復巔倒翻轉(zhuǎn)直到熒光素完全溶解。
b． 可以現(xiàn)配現(xiàn)用，或者分裝好保存于-20℃。
2、 加配好的熒光素儲存液到預溫的組織培養(yǎng)基中，使熒光素的終濃度為：150ug/ml。
3、 吸出培養(yǎng)細胞（沒有培養(yǎng)基殘留）。
4、 在成像前立即加入150ug/ml的熒光素溶液到細胞中。
a． 為了加強信號，在成像前可以把培養(yǎng)好的細胞在37℃中短暫的孵育。
 
小鼠活體內(nèi)熒光檢測：熒光素的配制

試劑：
D-熒光素鉀鹽（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
DPBS不含Mg2+和Ca2+
操作步驟：
1、 溶熒光素于DPBS中終濃度為：15mg/ml。
2、 用0.2um 濾膜濾滅溶液。
3、 每個小鼠每克體重注射10ul（15mg/ml）熒光素儲存液。
4、 成像前10-15min內(nèi)注射小鼠腹腔內(nèi)。
a．應用于每個動物模型的熒光動力學研究，以確定峰值信號時間。
 
關于D-熒光素鉀鹽的常見問題回答：

1、 熒光素可以用于動物活體嗎？

答：我們許多客戶用熒光素作用于動物活體，目前世界上合成熒光素主要有兩大生產(chǎn)商，因此目前您使用的就是這兩種生產(chǎn)商其中之一生產(chǎn)的。請注意：Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin，而我們公司出售的是Firefly Luciferin，但這兩種的結(jié)構(gòu)是相同的（結(jié)構(gòu)式如下）。

2、 怎么溶解熒光素？溶解后怎樣使它穩(wěn)定？

答：許多客戶已經(jīng)告訴我們熒光素溶于水中，然后分裝好保存于-80℃，不會有重大的影響。然而，關于溶解后熒光素的穩(wěn)定性也有相矛盾的報道。對于大多敏感的實驗，為了減少一些實驗中的可變因素我們強烈建議您現(xiàn)配現(xiàn)用（比如低濃度的酶或者不合適的反應溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來驅(qū)使反應的完成。）