高效液相色譜儀分析過程中影響溶質(zhì)遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值相差很大，即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留也可能差別很大，因此，高效液相色譜與氣相色譜相比，定性的難度更大。

高效液相色譜儀分析中常用的定性方法有利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性、利用檢測器的選擇性定性和利用紫外檢測器全波長掃描功能定性等。

一、利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性：

利用標(biāo)準(zhǔn)樣品對未知化合物定性是最常用的高效液相色譜定性方法。

由于每一種化合物在特定的色譜條件下（流動(dòng)相組成、色譜柱和柱溫等相同），其保留值具有特征性，因此，可以利用保留值進(jìn)行定性。如果在相同的色譜條件下，被測化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，可以初步認(rèn)為被測化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。若流動(dòng)相組成經(jīng)多次改變后，被測化合物的保留值仍與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，就能進(jìn)一步證實(shí)被測化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一化合物。

二、利用檢測器的選擇性定性：

同一種檢測器對不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的，而不同的檢測器對同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當(dāng)某一被測化合物同被兩種或兩種以上檢測器檢測時(shí)，兩檢測器或幾個(gè)檢測器對被測化合物檢測靈敏度比值與被測化合物的性質(zhì)是密切相關(guān)的，可以用來對被測化合物進(jìn)行定性。這是雙檢測器定性的基本原理。

雙檢測器體系的聯(lián)接有串聯(lián)聯(lián)接和并聯(lián)聯(lián)接方式。當(dāng)兩種檢測器中的一種是非破壞型的，可以采用簡單的串聯(lián)聯(lián)接方式，方法是將非破壞型檢測器串接在破壞型檢測器之前。若兩種檢測器都是破壞型的，需采用并聯(lián)方式聯(lián)接，方法是在色譜柱的出口端連接一個(gè)三通，分別聯(lián)接到兩個(gè)檢測器上。在高效液相色譜中最常用于定性分析的雙檢測體系是紫外檢測器（UVD）和熒光檢測器（FLD）。

三、利用紫外檢測器全波長掃描功能定性：

紫外檢測器是高效液相色譜中使用最廣泛的一種檢測器。全波長掃描紫外檢測器可以根據(jù)被檢測化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值，即濃度最大時(shí)，通過停泵等手段，使組分在檢測池中滯留，然后對檢測池中的組分進(jìn)行全波長掃描，得到該組分的紫外可見光譜圖，再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。某些有特殊紫外光譜圖的化合物也可以通過對照標(biāo)準(zhǔn)譜圖來識(shí)別。

此外，利用二極管陣列檢測器得到的色譜信號、時(shí)間和波長的三維譜圖進(jìn)行定性，比傳統(tǒng)方法優(yōu)勢更大。

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