摘要:目的研究銀耳提取物對(duì)大鼠抗抑郁活性的影響·方法采用雄性Wistar大鼠(體重180 - 220 g)建立慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠模型，建模成功大鼠隨機(jī)分為4組，分別為模型組(生理鹽水2.0 ml/kg)，銀耳提取物低劑量組((0. 5 g / kg) ,銀耳提取物中劑量組(1.0 g/kg)，銀耳提取物高劑量組(1. 5 g/kg)，取空白未建模大鼠作為空白組，給予等體積的生理鹽水，五組大鼠連續(xù)灌胃給藥28 d，觀察大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間和游泳不動(dòng)時(shí)間，并測(cè)定大鼠血漿及下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺、去甲腎上腺素(NEB含量。結(jié)果1.5 g/kg銀耳提取物可以顯著提高抑郁大鼠體重(P<0.01)，增加大鼠蔗糖偏愛(ài)度(P<0.01)，同時(shí)1.0一1.5 g/kg銀耳提取物劑量依賴性的減少大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間和游泳不動(dòng)時(shí)間(P < 0. 05)，增加大鼠血漿及下丘腦多巴胺(DAB含量(P < 0. 05) 1. 5 g/kg銀耳提取物顯著提高大鼠血漿及下丘腦去甲腎上腺素(NE)含量(P<0.01)。結(jié)論銀耳提取物具有顯著的抗抑郁活性，其作用可能與其增加大鼠血獎(jiǎng)及下丘神經(jīng)遞質(zhì)含量相關(guān)。

關(guān)鍵詞:銀耳;慢性應(yīng)激;抗抑郁;去甲腎上腺素;多巴胺

抑郁癥是一組高患病、高復(fù)發(fā)、高自殺、易致殘的重性精神障礙資料顯示，我國(guó)高中生抑郁癥狀發(fā)生率為25 . 8 %，大學(xué)生抑郁癥狀檢出率在20 %-60 %，患病率高于國(guó)內(nèi)其他職業(yè)人群及國(guó)外水平。WHO己將抗抑郁藥列為21世紀(jì)最需迫切開(kāi)發(fā)的藥物之一。

抑郁癥的病因目前尚未闡明，普遍接受的是生物胺假說(shuō)，即抑郁癥患者腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)中的生物胺類等水平下降導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生。臨床使用的抗抑郁西藥多據(jù)此開(kāi)發(fā)，這些藥物的療效肯定，同時(shí)也存在巨大的副作用，且價(jià)格昂貴，藥物依賴性強(qiáng)，巴戟天提取物、姜黃素等中藥均被證明具有很好的抗抑郁活性。銀耳又稱作白木耳、雪耳，研究證明銀耳提取物具有保肝抗腫瘤等活性，但是未見(jiàn)關(guān)于銀耳抗抑郁活性的報(bào)道。

本研究建立大鼠漫性應(yīng)激抑郁癥模型，在動(dòng)物體內(nèi)中證明銀耳提取物的抗抑郁活性，并考察銀耳的抗抑郁活性是否同其增強(qiáng)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)分泌相關(guān)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物健康成年雄性Wistar大鼠,180 - 220 g購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品所，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為:SCXK(遼)2013一0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(吉)2014 - 0004，飼養(yǎng)期間給予大鼠標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及純凈飲水，飼養(yǎng)條件:室溫23度，濕度52%一58%，保持12 h晝夜節(jié)律(白晝時(shí)間為7 : 00 -19:00)，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑Rat DA Elisa kit ，Rat NE Elisa kit，購(gòu)買(mǎi)自上海源葉生物試劑有限公司。其他試劑均為分析純，購(gòu)買(mǎi)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3儀器 多功能酶標(biāo)儀，購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)伯騰;恒溫培養(yǎng)箱，購(gòu)買(mǎi)自黃石市醫(yī)療器械廠。恒溫水浴，購(gòu)買(mǎi)自江蘇金壇醫(yī)療儀器廠;RE - 52E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，購(gòu)買(mǎi)自上海雅榮公司。懸尾實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，購(gòu)買(mǎi)自上海欣軟信息科技有限公司 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，購(gòu)買(mǎi)自上海欣軟信息科技有限公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4. 1銀耳多糖粗提物的制備干燥銀耳100 g按液料比10:1 (ml/g)的比例加入去離子水，80℃水浴提取3h，冷卻至室溫，8 000 r/min離心10 min，收集上清，得銀耳水提液，提取重復(fù)一次，合并兩次提取液，凍干，得銀耳提取物，采用苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量為14. 67 %，備用。

1.4.2大鼠抑郁癥模型的建立實(shí)驗(yàn)采用改性慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型(CUMS)建立抑郁癥大鼠模型，空白組大鼠不給予任何刺激;每組16只大鼠，實(shí)驗(yàn)組大鼠單籠飼養(yǎng)，并在實(shí)驗(yàn)周期(8周)內(nèi)給予模型大鼠7種不同的慢性應(yīng)激原刺激，慢性應(yīng)激原包括:①24 h潮濕墊料;②0℃冰水浴強(qiáng)迫游泳5 min ;③懸掛5 min;④夾尾1  min順50 0C烘箱烘烤5 min ; )24 h禁食，12

h禁水;⑦晝夜顛倒。上述刺激，每7d為一周期，順序隨機(jī)但同一刺激原不得連續(xù)使用，方案見(jiàn)表1

1.4.3大鼠分組及給藥慢性應(yīng)激四周后，大鼠隨機(jī)分為5組，分別為:空白組(Control):空白未建模大鼠，第5 -8周灌胃給予2. 0 ml/kg生理鹽水;模型組:8周慢性不可預(yù)知應(yīng)激，第5 -8周灌胃給予2. 0 ml/kg的生理鹽水;銀耳提取物低劑量組:8周慢性不可預(yù)知應(yīng)激，第5 -8周灌胃給予0. 5 g/kg的生理鹽水;銀耳提取物中劑量組:8周慢性不可預(yù)知應(yīng)激，第5-8周灌胃給予1.0 g/kg的生理鹽水;銀耳提取物高劑量組:8周慢性不可預(yù)知應(yīng)激，第5-8周灌胃給予1.5g/kg的生理鹽水。大鼠連續(xù)灌胃給藥28 d，給藥期間繼續(xù)給予刺激。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由取食和飲水。

1.4.4蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)給藥結(jié)束后，大鼠適應(yīng)性的飲用1%的蔗糖溶液3d后飲用正常飲用水1 d,測(cè)試前2h，單籠飼養(yǎng)大鼠，正常攝食，分別為大鼠供應(yīng)1%蔗糖溶液和自來(lái)水，此過(guò)程需要保持各試驗(yàn)組蔗糖水的位置均衡。1h后，測(cè)定液體飲用量。蔗糖水偏愛(ài)度1%蔗糖水的消耗量占總消耗量的百分比。

1.4.5懸尾實(shí)驗(yàn)第27 d給藥1h后，在大鼠尾部距尾尖端1 cm處用醫(yī)用膠布粘縛，將其倒吊于距離地面15 cm左右的橫桿上，觀察6 min，記錄大鼠后5 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間，大鼠之間采用白板遮擋，避免相互干擾。

1.4.6強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)第28 d給藥1h后，將大鼠放于直徑約20 cm，水深17 cm，水溫(2211)0C的塑料桶中，實(shí)驗(yàn)觀察6 min，記錄后5 min內(nèi)大鼠累積不動(dòng)時(shí)間。

1.4.7組織收集及DA NE含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠斷頭取血，收集血漿。快速摘取大鼠下丘腦組織，采用雙蒸水勻漿后，用于含量測(cè)定。

1.4.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用(x1s)表示，采用單因素方差分析(ANO-VA)統(tǒng)計(jì)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)。= 0. 05(雙側(cè))。

2結(jié)果

2. 1銀耳提取物對(duì)大鼠體重的影響與空白組相比，模型組大鼠體重顯著降低(P<0.01)，與模型組相比，1.5 g/kg銀耳提取物可以顯著提高慢性應(yīng)激抑郁大鼠體重(P <0.01)，見(jiàn)圖1

2. 2銀耳提取物對(duì)大鼠蔗糖偏愛(ài)的影響見(jiàn)圖2。與空白組相比，模型組大鼠蔗糖偏愛(ài)度顯著下降(p<0.01)。1.5 g/kg銀耳提取物顯著提高大鼠的糖水偏愛(ài)度(P <0.01)。

2. 3銀耳提取物降低大鼠不動(dòng)時(shí)間與空白組相比，模型組大鼠5  min內(nèi)懸尾不動(dòng)時(shí)間均顯著上升(P<0.01),1.0,1.5 g/kg的銀耳提取物顯著降低5 min大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間(P <0.05) o

與大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間相同，與模型組大鼠相比，1.0,1.5 g/kg銀耳提取物顯著降低5 min內(nèi)大鼠游泳不動(dòng)時(shí)間(P<0.01)，見(jiàn)圖3。

2. 4銀耳提取物提高大鼠下丘腦及血漿NE,DA含量與空白大鼠相比，模型組大鼠下丘腦及血漿中DE,NE水平顯著下降(P <0.05) ,1.0,1.5 g/kg銀耳提取物可以顯著提高大鼠下丘腦及血漿DA含量(P<0. 05 )。同時(shí)銀耳提取物劑量依賴性的增強(qiáng)大鼠下丘腦NE含量(P <0.01)，見(jiàn)圖4。

3討論

慢性應(yīng)激抑郁大鼠的一個(gè)非常重要的抑郁樣的表型就是對(duì)蔗糖偏愛(ài)度的下降。在本研究中，與空白組相比，模型組大鼠蔗糖偏愛(ài)度顯著下降，而銀耳提取物顯著增加抑郁癥大鼠蔗糖偏愛(ài)度，推斷1.5 g/kg銀耳提取物具有抗抑郁活性。

強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)等是目前常用的抗抑郁藥物篩選的行為學(xué)檢測(cè)方法，其原理均為將動(dòng)物置于不可逃避的環(huán)境中，動(dòng)物會(huì)拼命掙扎，企圖逃跑，在經(jīng)過(guò)努力不能脫困后，出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，表現(xiàn)為“行為絕望”狀態(tài)，與抑郁癥類似，絕多大數(shù)抗抑郁藥均可縮短動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。研究發(fā)現(xiàn)，1.0,1.5 g/kg銀耳提取物顯著提高5 min內(nèi)抑郁大鼠行為不動(dòng)時(shí)間(P<0. 05 )，因此推斷銀耳提取物具有一定的抗抑郁活性。

抑郁癥的發(fā)病率正在逐步攀升，預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于心臟病的第二大疾病，抑郁癥發(fā)病機(jī)制至今未明，但大量實(shí)驗(yàn)研究表明NE,DA等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量改變與抑郁癥有密切關(guān)系。隨著對(duì)抗抑郁癥發(fā)病機(jī)制的深入了解，天然抗抑郁藥物的研究和開(kāi)發(fā)也成了新的熱點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)

本研究通過(guò)慢性應(yīng)激建立抑郁癥大鼠模型，在大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，證明了銀耳提取物的抗抑郁癥活力，其作用與增加大鼠血漿及下丘腦DA NE含量直接相關(guān)。本研究為銀耳作為抗抑郁保健食品及藥品的廣泛應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。