注意缺陷大鼠多動障礙模型的建立

本研究探討注意缺陷多動障礙大鼠模型的建造技術。方法:將20只4周齡SD大鼠隨機分成模型組和對照組，模型組自由飲用0.2 mg/mL醋酸鉛溶液。28 d后運用開場實驗、Morris水迷宮、Lat迷宮觀察兩組大鼠行為學表現。采用ICP一MS檢測大鼠血鉛濃度、酶聯免疫吸附測定法法(ELISA)測定大鼠血清中多巴胺和去甲腎上腺素含量。結果:模型組在開場實驗中大鼠穿越格子數、直立次數增多(P < 0. 05 ) ，Lat迷宮中直立次數及穿越角落的時間比例增加(P< 0. 05} ，Morris水迷宮目標象限停留時間縮短（P <0.05）;模型組大鼠血鉛濃度高于對照組(P < 0. 05 ) ,血清多巴胺和去甲腎上腺素含量低于對照組，差異有統訓一學意義(P<0.05)。結論:采用自由飲用0. 2 mg/mL醋酸鉛溶液法成功建造了ADHD大鼠模型，具有ADHD基本臨床特征，可做為ADHD的動物模型進行實驗研究。

「關鍵詞」注意缺陷多動障礙模型;醋酸鉛;SD大鼠;行為學檢測;多巴胺;去甲腎上腺素

1材料與方法

1. 1實驗動物與分組20只SD大鼠,4周齡，雄性，SPF級(北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部)，許可證號:SCXK(京)2011一0012。實驗室適應3d后，隨機分為A,B兩組(即模型組和對照組)。5只/籠(鼠籠25 cm x 45 cm x15 om)，明暗交替比12: 12 h (7: 00一19 : 00)，室溫20-22度,濕度適宜，大鼠自由進食和飲水。

1. 2實驗方法

1. 2. 1大鼠模型建造采用0. 2 mg/mL的醋酸鉛溶液自由飲用法建造模型，對照組自由飲用蒸餾水，余其同。

1.2.2行為學檢測

1. 2. 2. 1開場實驗:開場實驗視頻分析系統及開場實驗箱由上海欣軟信息科技有限公司提供。開場實驗箱由醫(yī)用有機板制成，規(guī)格為50 cm X 50 cm X 50 cm，采用九宮格為測試基底。測試前1d將大鼠放入開場箱10 min適應環(huán)境，以減少大鼠對陌生環(huán)境產生的焦慮而影響其活動水平，實驗開始時將大鼠輕輕放入中央格子，在光亮條件下，通過視頻分析系統自動記錄大鼠5 min內的活動情況，記錄大鼠穿越的格子數、直立次數、理毛次數以及糞便數。測試期間保持周邊光線和噪聲的一致性。

1 .2. 2. 2

Morris水迷宮測試:Morris水迷宮視頻分析系統由上海欣軟信息科技有限公司提供， Morris水迷宮箱體(箱體由直徑155 cm，高50 cm灰白色鐵皮圓形蓄水池及同顏色平臺構成)，池內水深25 cm，水溫22-24 度。將水池平均分為四個象限，平臺頂端平而而積為8 cm X 8 cm，訓練期間迷宮外參照物的位置保持不變。將大鼠置于一個象限內，距圓心21 cm，距池壁20 cm，隱沒于水而下1.5 cm(訓練期間平臺位置不變)。第1d不設立平臺，讓大鼠進入水池自由游60 s進行適應性訓練。從第2d開始連續(xù)5d隨機地從四個不同象限讓大鼠進入水中，大鼠入水尋找并逃避到平臺。視頻分析軟件記錄大鼠從入水到找到平臺所需時間(潛伏期)，若在120 s內大鼠無法找到平臺，則由檢測者引導其上平臺所有大鼠上臺后均停留10 s，以利于其對空間參照物的記憶。第6d去掉平臺，讓大鼠在水中游泳120 s，記錄大鼠穿越原平臺所在位置的次數、在原來平臺所在象限所停留的時間及路程，以此評價動物對己獲取信息的存儲、記憶能力。

1. 2. 2. 3  Lat迷宮:Lat迷宮視頻分析系統及Lat迷宮實驗箱由上海欣軟信息科技有限公司提供。Lat迷宮實驗箱為一個40 cm x 60 cm x 60 cm的木箱，中間放置一個30 cmx 30 cm的透明有機玻璃箱，從而產生一個寬15 cm、長60 cm、高40 cm的通道，根據視頻分析軟件分析記錄觀察大鼠穿越角落的時間和直立次數，作為對環(huán)境刺激的非選擇性注意水平的評價指標。

1.2.3生化指標測定

1. 2. 3. 1血鉛濃度的測定3. 0%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠 (40 mg/kg)，腹主動脈采血2. 5 mL于肝素抗凝管中待查;取2 mL全血于消解罐中，加8 mL濃硝酸冷消化1 h,按優(yōu)化程序進行微波消解，電熱板160℃趕酸后，用2. 0 %硝酸定容到25 mL，搖勻待測。采用電感藕

合等離子體質譜法(ICP一MS)測定全血中鉛含量。

1.2.3.2血清中多巴胺和去甲腎上腺素含量測定3. 0%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(40 mg / kg)后，腹主動脈采血4 mL于非抗凝管中，靜置3h，離心10 min (3 000rpm)，取上清1 mL，分裝到兩個EP管中，于一80℃保存?zhèn)溆�。大鼠血清中多巴胺和去甲腎上腺素含量測定:采

用北京利維寧生物科技有限公司提供的大鼠多巴胺和去甲腎上腺素酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒。

1. 3統計方法

采用SPSS 17. 0統計軟件，進行兩獨立樣本資料t檢驗。

結果：模型組在開場實驗中大鼠穿越格子數、直立次數增多(P < 0. 05 ) ，Lat迷宮中直立次數及穿越角落的時間比例增加(P< 0. 05} ，Morris水迷宮目標象限停留時間縮短（P <0.05）;模型組大鼠血鉛濃度高于對照組(P < 0. 05 ) ,血清多巴胺和去甲腎上腺素含量低于對照組，差異有統訓一學意義(P<0.05)。結論:采用自由飲用0. 2 mg/mL醋酸鉛溶液法成功建造了ADHD大鼠模型，具有ADHD基本臨床特征，可做為ADHD的動物模型進行實驗研究。