1. 透析袋原理
技術(shù)指標(biāo):MWCO(截留分子量),單位:Diatoms 。
透析時(shí),小于MWCO的分子在透析膜二邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下滲過(guò)透析膜,其速度與濃度梯度、膜面積及溫度成正比。欲快速透析可采用直徑較小的透析袋以增加膜面積。常用溫度:4℃,升溫、更換袋外透析液或用磁力攪拌器,均能提高透析速度。
2. 透析袋用途
透析即用半透膜(透析袋)將大分子蛋白質(zhì)分離出來(lái)。在生物大分子制備過(guò)程中除去鹽、少量有機(jī)溶劑、生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品,透析法最簡(jiǎn)便。
3. 透析袋使用方法:
① 把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10cm左右)的小段。
② 取適量透析袋處理液(Fast-Tre Solution)稀釋100倍,將透析袋放于其中煮沸10分鐘。
③ 取出用蒸餾水徹底清洗透析袋。
④ 暫不使用的話需要將透析袋完全浸泡到稀釋100倍后的透析袋儲(chǔ)存液(Long-Sav Solution)中,存放于4度。從此時(shí)起取用透析袋是必須戴手套。
⑤ 浸泡在透析袋儲(chǔ)存液中的透析袋取出使用前,須將透析袋內(nèi)裝滿水然后排出,將之清洗干凈,沖洗三次即可。
實(shí)驗(yàn)要求不高的可以用簡(jiǎn)易處理方法:在沸水中煮10min即可使用
⑥使用時(shí),一端用下沉透析袋夾子夾緊,灌滿水后,用手指適當(dāng)加壓,檢查不漏,方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過(guò)程中,袋外的水和緩沖液過(guò)量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內(nèi)放一玻璃珠,以使透析袋處于懸浮狀態(tài),即可進(jìn)行透析。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。
4. 透析袋相關(guān)配件
5.透析袋使用中注意事項(xiàng)及技巧
透析袋用之前一定要處理;
1)除鹽透析時(shí)將高鹽的樣本加入透析袋中,夾緊,用你選擇的保存液進(jìn)行透析,一般在2-8度透析過(guò)夜,中間要更換一到兩次透析液,另外透析液體積盡量大些。
先把透析液放進(jìn)容器中(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度),再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去,這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的,幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸,溶液的置換面積最大,置換速度最快。
如果夾子很穩(wěn),那就夾好,先把透析液放進(jìn)容器中(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度),再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去,這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的,幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸,溶液的置換面積最大,置換速度最快。
假如夾子夾不穩(wěn),那就盡量避免有夾子的一端接觸透析液,以免漏出去。把透析液放進(jìn)容器中(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度),再將夾好的透析袋平放進(jìn)去,這樣透析袋與透析液的接觸面積不大,大約只有一半的透析袋與透析液接觸,置換速度最慢。
假如夾子不是特別不穩(wěn),那就將透析袋兩端回折,夾子夾在回折的中間,這樣可以減小漏液的危險(xiǎn),再讓透析袋放在容器液面上,夾子向上(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度)。要注意定時(shí)打濕整個(gè)透析袋,不然接觸不到透析液的透析袋可能會(huì)干裂漏液。
透析袋一定不能裝滿,因?yàn)橥肝鲆旱臐B透壓低于透析袋內(nèi)樣品,樣品中的鹽出去的時(shí)候透析液也會(huì)進(jìn)來(lái),造成樣品的體積增大,嚴(yán)重的時(shí)候可能會(huì)脹破透析袋,在夾子不穩(wěn)時(shí)會(huì)很容易漏液。
除了第一次使用,透析袋還是干的,要預(yù)處理之外,第二次就不用預(yù)處理了。透析袋用完之后要沖洗干凈,然后4度保存,要保濕不能干掉。要是干了或者生長(zhǎng)微生物,就丟棄,免得影響實(shí)驗(yàn)效果。
透析的時(shí)間不確定,但是勤攪拌(例如磁力攪拌)和勤換洗脫液會(huì)加快達(dá)到目的的速度。
2)蛋白質(zhì)吸附量,小于1ug/克,(以透析袋干重計(jì))。
正常使用PH值5-9(可重復(fù)使用)。
極限使用PH值2-12(一次性使用)。
3)前處理:煮沸5分鐘后用蒸餾水60℃洗沖2分鐘,置4℃蒸餾水中待用。
長(zhǎng)期保存液:0。05%-0。1%疊氮鈉,1mMEDTA或50%甘油,溫度(4℃),使用前以蒸餾水洗凈。
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