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免疫熒光必備ProLong Gold & SlowFade Gold抗淬滅效果比照明細(xì)

瀏覽次數(shù)：3587　發(fā)布日期：2015-7-22　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

如果熒光染色的目標(biāo)分子豐度比較低或者樣本在強(qiáng)激發(fā)光下長(zhǎng)時(shí)間放置，很容易出現(xiàn)明顯的光漂白作用，即熒光淬滅作用。專門開(kāi)發(fā)了 ProLong 和 SlowFade 兩個(gè)系列抵抗熒光信號(hào)淬滅的試劑。其主要原理是可以有效避免熒光染色后的固定細(xì)胞或組織等樣品不被氧化，從而防止熒光淬滅導(dǎo)致的熒光信號(hào)減弱現(xiàn)象。

則能提供給樣品熒光信號(hào)數(shù)月的保護(hù)，只要將樣品封片放置在干燥避光的環(huán)境下，熒光信號(hào)可以在一年甚至更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不減弱或是淬滅。但該系列產(chǎn)品在處理樣品以后必須室溫避光放置 24 小時(shí)才能進(jìn)行觀察和圖象記錄，否則其熒光顏色會(huì)因折光律的改變而與實(shí)際顏色有所不同（圖 1）。

處理樣品后可以直接進(jìn)行觀察與圖象記錄，其可保證熒光信號(hào)在 3 到 4周內(nèi)不明顯減弱，如果適當(dāng)封片還可以延長(zhǎng)更多時(shí)間。

抗淬滅劑使用簡(jiǎn)便，只需加 1 滴至玻片即可。

Figure 1. ProLong® Gold 在凝固的過(guò)程中折射率不斷增加

Figure 2. ProLong® Gold (圖 A) and SlowFade® Gold (圖 B)

抗淬滅劑有效防止光漂白用不同的抗淬滅劑將 FITC 標(biāo)記的微球封片，

100 瓦貢弧燈照射 30 秒，40x/1.3 NA 油鏡觀察，

12-bit 單色 CCD 成像。取20 個(gè)微球的平均熒光強(qiáng)度作圖。

ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 的抗淬滅效果：

（以 40X/1.3 NA 物鏡 100 瓦貢弧燈連續(xù)照射 30 秒后，與初始熒光強(qiáng)度相比的百分率表示）

操作步驟：

適用于多數(shù)的固定樣品，但由于含有甘油，不適于某些用途，如親脂的膜染料 Dil。

1．1 預(yù)溫試劑：

從冰箱中取出試劑，平衡至室溫；不推薦使用其他的熱源，這樣會(huì)降低產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

1．2 加封片介質(zhì)（抗淬滅劑）：

將切片上多余的液體去除，加 1 滴（或適量）抗淬滅劑，蓋上蓋玻片；樣本固定在蓋玻片上的，加1 滴抗淬滅劑于干凈的玻片上，小心將蓋玻片放到滴有淬滅劑的位置，避免產(chǎn)生氣泡。

1．3準(zhǔn)備觀察：

用 ProLong 封片的，將玻片置于黑暗干燥處待其凝固，時(shí)間從幾個(gè)小時(shí)到過(guò)夜，依樣本的厚度和環(huán)境的相對(duì)濕度而不同。推薦凝固 24 小時(shí)。若需長(zhǎng)期貯存，在凝固后將蓋玻片的邊緣封住，防止封片劑收縮使樣品扭曲變形。封好后，將玻片豎直存放在有蓋的玻片盒中，室溫、4℃或≤-20℃保存，加入干燥劑。若需馬上觀察，用指甲油或熱蠟固定蓋玻片的一角防止移動(dòng)，邊緣保持干凈便于凝固。凝固后再將邊緣封好便于長(zhǎng)期保存。

用 SlowFade 封片的，可立即觀察。較厚的樣品，要等到試劑完全滲透。必要時(shí)也可以用指甲油或熱蠟固定蓋玻片的一角后觀察。

熒光顯微鏡的設(shè)置：

樣本在抗淬滅劑干燥之前也可以觀察，但二者接觸的越久，抗淬滅的效果越好，尤其是 ProLong，其折射率也會(huì)有變化。減少在光下的暴露時(shí)間，用中等強(qiáng)度的濾光片，僅在觀察和記錄圖像時(shí)光照。保證好的成像效果，拍照時(shí)用最小光學(xué)、最高數(shù)字的光圈，較低的放大倍數(shù)，高質(zhì)量的光學(xué)濾片，高速膠片和高效的鏡頭。

另外，ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 抗淬滅劑還有含 DAPI 的型式，減少了復(fù)染 DNA 的步驟。

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免疫熒光必備ProLong Gold & SlowFade Gold抗淬滅效果比照明細(xì)

ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 的抗淬滅效果：

操作步驟：

適用于多數(shù)的固定樣品，但由于含有甘油，不適于某些用途，如親脂的膜染料 Dil。

1．1 預(yù)溫試劑：

1．2 加封片介質(zhì)（抗淬滅劑）：

1．3準(zhǔn)備觀察：

熒光顯微鏡的設(shè)置：

相關(guān)產(chǎn)品

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免疫熒光必備ProLong Gold & SlowFade Gold抗淬滅效果比照明細(xì)

ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 的抗淬滅效果：

操作步驟：適用于多數(shù)的固定樣品，但由于含有甘油，不適于某些用途，如親脂的膜染料 Dil。

1．1 預(yù)溫試劑：

1．2 加封片介質(zhì)（抗淬滅劑）：

1．3準(zhǔn)備觀察：

熒光顯微鏡的設(shè)置：

相關(guān)產(chǎn)品

操作步驟：

適用于多數(shù)的固定樣品，但由于含有甘油，不適于某些用途，如親脂的膜染料 Dil。