一種基于量子點探針和側(cè)向流層析的快速靈敏的檢測禽流感病毒的方法

摘要：我們開發(fā)了一種新的快速、超靈敏的檢測禽流感病毒的熒光免疫檢測方法，該方法整合了側(cè)向流層析技術(shù)和無標(biāo)記、高發(fā)光的量子點新材料。通過對側(cè)向流試紙條上進(jìn)的的夾心免疫反應(yīng)，金納米粒子標(biāo)簽在檢測線上被捕獲，同時被釋放的大量金粒子作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的橋梁，被量子點通過熒光淬滅的方法檢測到。在最佳的條件下，量子點熒光強(qiáng)度在AIV 0.27-1.2ng/ml的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。檢測極限達(dá)到0.09ng/ml，比ELISA高出100倍。其靈敏度和特異性反應(yīng)具有較高的重復(fù)性。六組平行檢測重復(fù)性熒光信號產(chǎn)生的行動標(biāo)準(zhǔn)差為4.7%。該方法能夠直接用于臨床樣品檢測，而不需要預(yù)處理。與病毒分離（膠體金）方法相比，該方法具有高效率（90.0%）、高靈敏度（100.0%）、高特異性（88.2%）的優(yōu)點。新的方法能夠快速、靈敏的定量檢測禽流感病毒，在醫(yī)療診斷領(lǐng)域具有較好的前途。

 

1、 采用熒光免疫分析方法檢測禽流感病毒的原理圖

2、膠體金與禽流感病毒抗體偶聯(lián)效果，與偶聯(lián)前相比，偶聯(lián)后吸收峰出現(xiàn)紅移，吸收峰波長變大，通過電鏡成像分析，偶聯(lián)后直徑變大

3、采用負(fù)染色電鏡成像技術(shù)顯示膠體金與AIV抗體偶聯(lián)物與抗原AIV結(jié)合后，整體直徑變大，通過膠體金定性分析，T線有明顯條帶，說明在T線中發(fā)生抗體抗原免疫反應(yīng)。

4、不同的金離子濃度對I₀/I的影響，隨著金離子濃度的升高，I值會逐漸降低，比值逐漸升高

5、HCL和Br2對溶解釋放出金離子最佳濃度的優(yōu)化，最后選擇0.15mol/L HCl 和0.8mol/L/Br2復(fù)合物

 

6，AIV濃度與量子點相對熒光強(qiáng)度的關(guān)系圖，在0.27–12 ng /mL內(nèi)呈直線關(guān)系，線性關(guān)系很好隨著AIV濃度的增加，逐漸趨向水平

7，文章提供的方法與幾種AIV常規(guī)檢測方法對比，靈敏度高很多

 

8，通過檢測20種臨床樣品，與病毒分離方法相比，文獻(xiàn)提供的方法擁有其90.0%的效率，100.0% 靈敏度和and 88.2%特異性。