在ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本值低于空白值是一個(gè)經(jīng)常性的問(wèn)題。當(dāng)樣本值較低接近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本的檢測(cè)。究其原因，主要在于兩個(gè)方面，一方面是誤差，另一方面是基質(zhì)效應(yīng)。下文逐個(gè)分析不同影響因素的原理、和解決方案。

一、誤差 Error

誤差分為三類(lèi)，系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差和過(guò)失誤差。這三類(lèi)誤差中，系統(tǒng)誤差對(duì)樣本值和空白值之間的差異無(wú)影響。ELISA樣本值低于空白值在誤差方面主要來(lái)源于隨機(jī)誤差和過(guò)失誤差。

二、基質(zhì)效應(yīng) Matrix Effect

分析中，基質(zhì)指的是樣本中被分析物之外的組分，基質(zhì)常常對(duì)分析物的分析過(guò)程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這些影響和干擾被稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)。ELISA試劑盒在開(kāi)發(fā)過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)品不能采用人或動(dòng)物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液，只能采用其模擬物。模擬物與被測(cè)樣本在蛋白豐度、復(fù)雜性、pH等因素都會(huì)存在差異。當(dāng)樣本的基質(zhì)與其模擬物相比，降低抗原抗體的結(jié)合，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。造成樣本值無(wú)法計(jì)算出數(shù)值，或者數(shù)值為負(fù)。

目前最常用的去除基質(zhì)效應(yīng)的方法是，通過(guò)已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，同時(shí)盡可能保持樣本中的基質(zhì)不變，建立一個(gè)校正曲線（Calibration Curve）。

當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是誤差原因，這時(shí)應(yīng)增加重復(fù)，提高操作技能。當(dāng)大量樣本都低于空白值時(shí)，應(yīng)考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修正。