1.將肌肉組織粗樣分別放入5ml普通圓底或特制研磨管,放入的樣品量約占單管1/3體積為最佳;
2.在每個離心管中放入3顆直徑8mm的不銹鋼研磨珠,蓋好管蓋,將離心管對稱裝入適配器中,固定到2個搖臂上;
3.將TL2010S組織破碎儀參數(shù)設(shè)置為轉(zhuǎn)速1800rpm,循環(huán)5次,每研磨60秒停止研磨10S(即間歇研磨5分鐘);
上圖為TL2010S組織破碎儀
使用TL2010S組織破碎儀可一次性高速破碎不同體積和數(shù)量的樣品。不僅操作靈活方便,還同時避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作。
測試中,離心管的選擇對樣品破碎的效果也有一定的影響。我們知道TL2010S組織破碎器還可搭配多個1.5/2.0ml離心管進行研磨,但這種規(guī)格的離心管相對實驗中要大量破碎的粗樣來說容量偏小,而且可容納的研磨珠也較小,撞擊力度也很有限,因而僅適合大量微量樣品的批量處理。而使用5ml離心管,單管放入的樣品量不僅增加了,還可放入更大尺寸的研磨珠以產(chǎn)生更大的撞擊力度,從而獲得更好的研磨效果。
另一個關(guān)鍵因素則是間歇研磨,這是TL2010S自動組織破碎儀一個特色功能之一,對破碎效果也有一定的提升作用。因為設(shè)置間歇時間,可以有效減少樣品在持續(xù)高速研磨破碎中因快速升溫而發(fā)生降解的情況,為后續(xù)實驗的順利進行提供保障。如果配合液氮低溫處理,可以更有效地降低樣品溫升,利于RNA提取等對溫度非常敏感的實驗。