1、方法提要

本方法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

2、所用的儀器、設備和培養(yǎng)基

a）浮游菌采樣器；

b）真空抽氣泵；

c）培養(yǎng)皿；

d）培養(yǎng)基；

e）恒溫培養(yǎng)箱。

浮游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器。

1、采用的浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。

2、狹縫式采樣器的原理

狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。

離心式采樣器由于內(nèi)部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。

1、狹縫式采樣器的使用要點

應嚴格按儀器說明書的要求進行操作。

2、校驗

采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。校驗的項目有：定時器、轉盤轉速、流量計。

3、每次測試前應按說明書上的規(guī)定，先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計及定時器。

4、空氣采樣量根據(jù)需要選定。已知采樣器的流量（L/min），設定采樣時間（min），兩者相乘即采樣量（L）。

1、儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調(diào)好流量、轉盤轉速。

2、關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。

3、置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間。

1、全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。

3、每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染�？擅颗�選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

1、用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

2、若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。

1、使用前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

2、采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。

3、對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。

4、由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

八、注意事項

1、采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造。

2、采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應光滑。

3、采樣管的長度應根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。

九、真空抽氣泵

1、真空抽氣泵的排氣量應與采樣器匹配。

2、宜采用無油真空抽氣泵，必要時可在非氣口安裝氣體過濾器。

3、真空抽氣泵安裝的位置必須適當，一般裝在采樣器下面。

十、培養(yǎng)皿

1、狹縫式采樣器一般采用Æ 150mm×15mm、Æ 90mm×15mm、Æ65mm×15mm三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿�？筛鶕�(jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

2、離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。

十一、培養(yǎng)基

普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。

十二、恒溫培養(yǎng)箱

必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。

十三、測試步驟

1、測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。

2、采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內(nèi)。

3、用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉盤。

6、采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

7、采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。