PCR新手指南：各種熱啟動酶存在的意義

各種熱啟動酶存在的意義

市場上熱啟動的酶種類很多，但新手并不完全了解熱啟動酶存在的意義。
非熱啟動的Taq酶在較低溫度時也有活性：我有一本1992年出版的《PCR基因擴增實驗操作手冊》中提到，酶在70度時的合成速度為60核苷/秒/酶分子，55度時為22，37度時為1.5，22度時為0.25。也就是說此時引物還沒有正常配對（其可能錯誤配對），而酶已經(jīng)開始合成了，其合成的產(chǎn)物就會成為以后擴增中的非特異模板。

則熱啟動酶只有在95度高溫一段時間后，其酶活動才啟動起來，故名：熱啟動酶。

這也是為什么進行PCR反應(yīng)加樣時，各種試劑要在低溫下加樣。但是不是在進行PCR反應(yīng)加樣時維持低溫就不需要熱啟動酶了呢？答案是也不盡然。

一般PCR儀在運行開始后熱蓋加熱過程中，模板溫度是不控制的。由于熱蓋的加熱需要1.5分鐘以上，且熱蓋溫度一般設(shè)在105度，必然會引起模塊溫度的上升，一般會到30-35度，環(huán)境溫度高時更甚。也就是說設(shè)計不完備的儀器也會提高非特異性反應(yīng)。

有些儀器的熱蓋在開機時就啟動，這樣做有可以廣場燙手且用戶開機后立即啟動PCR程序也會造成非特異性反應(yīng)。東勝龍811PCR儀的解決辦法是在運行開始后熱蓋加熱過程中迅速將模塊降溫到10度左右。熱蓋溫度到達后啟動程序運行。