PCR新手指南：PCR現(xiàn)在又?jǐn)U增不出來(lái)了怎么辦？

這個(gè)問(wèn)題是常見(jiàn)的問(wèn)題，就是一個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)一直都做得很好，停一段時(shí)間后再做就不行了。一通亂找原因后還是不行，很痛苦！

找問(wèn)題要從大到小：

1、PCR擴(kuò)增體系問(wèn)題
用其他正在進(jìn)行的且擴(kuò)增正常的模板和引物證明PCR擴(kuò)增體系沒(méi)有問(wèn)題，即PCR反應(yīng)混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的（陽(yáng)性對(duì)照）

2、引物問(wèn)題
用以前擴(kuò)增產(chǎn)物做模板（稀釋50倍），證明引物沒(méi)有問(wèn)題

3、只是模板問(wèn)題了。
因?yàn)闃颖窘到獾目赡苄员纫�物降解的可能性高得多。也可能是樣本中的抑制物過(guò)多（新鮮時(shí)沒(méi)有溶出來(lái)）。

不要靠運(yùn)氣找問(wèn)題，先做第一條很重要。亂找問(wèn)題常常讓人失去信心的。