利用CORTECS實心核顆粒色譜柱進行HPLC梯度方法轉(zhuǎn)換
利用CORTECS實心核顆粒色譜柱進行HPLC梯度方法轉(zhuǎn)換
Jonathan E. Turner, Bonnie A. Alden, Mia Summers, Kenneth Berthelette 和 Kenneth J. Fountain
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介
將使用填充了大顆粒的大體積色譜柱的HPLC梯度方法轉(zhuǎn)換至填充高效CORTECS 2.7 μm顆粒的小體積色譜柱，可輕松縮短分析時間、節(jié)省溶劑與樣品消耗量，最終節(jié)約成本。在轉(zhuǎn)換HPLC梯度方法時，可通過適當(dāng)調(diào)整方法條件和選擇相當(dāng)?shù)纳V柱填料來避免對色譜分離性能的影響。
下述應(yīng)用紀(jì)要展示了針對阿巴卡韋相關(guān)化合物的典型HPLC梯度方法進行適當(dāng)?shù)姆椒ㄞD(zhuǎn)換。阿巴卡韋(Ziagen®)是一種核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，被用于抗HIV的治療。該樣品由五種化合物組成，其中四種為主要成分阿巴卡韋的相關(guān)物質(zhì)，如圖1所示。此類檢測常用的色譜柱為全多孔C18, 5 μm, 4.6 x 150 mm色譜柱。通過轉(zhuǎn)換為CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱，可大大縮短該梯度方法的分析時間，同時還能保持目標(biāo)峰的選擇性和分離度。
結(jié)果與討論
基于此類檢測常用的色譜柱為全多孔C18, 5 μm色譜柱，因此選擇CORTECS C18, 2.7 μm填料用于方法轉(zhuǎn)換。向2.7 μm顆粒填充的色譜柱轉(zhuǎn)換時需要75 mm的色譜柱長度來保持L/dp比例。該方法轉(zhuǎn)換中選擇4.6 x 75 mm的色譜柱。色譜柱長度的變化需要將進樣體積從8 L調(diào)整為4 μL。因為色譜柱的內(nèi)徑并無變化，所以僅根據(jù)填料粒度的變化來調(diào)整流速。調(diào)整后的流速經(jīng)計算為1.85 mL/min。色譜柱配置與流速的調(diào)整需要對每個時間段的梯度進行調(diào)整，從而確保在同等色譜柱體積條件下進行分離。
表1和圖2顯示了方法轉(zhuǎn)換的對比情況。采用CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱的轉(zhuǎn)換方法與采用全多孔C18, 5 μm色譜柱的方法具有相同的選擇性。同時還保持了兩對關(guān)鍵峰的分離度值。CORTECSC18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色譜柱生成的反壓為4400 psi，完全在HPLC儀器的壓力限值(5000 psi)內(nèi)。將HPLC梯度法轉(zhuǎn)換至CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱，分析時間縮短約四倍，同時溶劑消耗量節(jié)省了兩倍。
結(jié)論
可輕松將使用填充大顆粒的大體積色譜柱的HPLC梯度方法轉(zhuǎn)換至填充高效CORTECS顆粒的小體積色譜柱。本應(yīng)用紀(jì)要介紹對阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)的典型HPLC梯度方法的進行成功轉(zhuǎn)換，其通量增加了約四倍，同時保持了色譜分離性能。除了節(jié)省了時間外，溶劑消耗量還降低了約兩倍。當(dāng)采用CORTECS C18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色譜柱時，
所生成的反壓為4400 psi，完全在HPLC儀器的壓力限值(小于5000 psi)內(nèi)。HPLC梯度方法向CORTECS 2.7 μm色譜柱轉(zhuǎn)換時增加了通量，降低了溶劑消耗量，從而大大節(jié)約了成本。
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