五洲鼎創(chuàng)QM100高通量組織研磨儀在酵母細(xì)胞低溫破碎中的使用說明
條形酵母是將酵母通過小孔注入到裝有液體氮的氣罐中壓縮制成的。將有1mm的篩子扣入到裝有10-20 ml球狀酵母的50ml破碎罐的頂部,經(jīng)過離心破碎變成了2L的條狀物。壓力是由人工用60ml的自由活塞注射器注入罐內(nèi),條狀可以在-80C°下被保存。
將不銹鋼破碎罐、破碎球和裝有條狀酵母的器皿放入到用聚苯乙烯盒子盛放液體氮中,當(dāng)預(yù)冷凍過程結(jié)束后,原來沸騰的液體氮恢復(fù)平靜
將破碎罐從池中取出,并要將破碎罐沾有的液體全部清理干凈,以避免在破碎過程中發(fā)生爆炸。破碎罐、破碎球和器皿最好用有把手的煤氣鉗或坩鍋鉗拿取,而且通常要帶經(jīng)過冷凍的手套。
將破碎球和條狀酵母移入破碎罐中。罐中裝有一半的條狀酵母,易碎的條狀酵母被破碎球預(yù)冷凍的抹刀破碎,酵母的數(shù)量不要超過破碎罐體積的1/3,否則破碎的效率就會變得很底下。
然后將破碎罐蓋緊,在安裝在破碎機(jī)之前將破碎罐再次放入到液體氮中幾秒鐘,然后將破碎罐夾緊。
破碎次數(shù)為5次,每次3分鐘,功率為30hz。在每次破碎后都要將破碎罐取下,放入到裝有液體氮的水池中。當(dāng)水池沸騰后,破碎可以繼續(xù)進(jìn)行。所需樣本最后可以得到,而且也通過顯微鏡可以看到有價值的破碎過程。
經(jīng)過15分鐘的破碎后,我們發(fā)現(xiàn)90%的酵母已經(jīng)達(dá)到破碎效果。
剩余的殘?jiān)换厥盏?0ml的器皿中以備后用或貯存。然后用一種具有永磁性的磁鐵把破碎球從殘?jiān)形龌厥铡?/FONT>
破碎罐和破碎球可以用溫的乙醇清洗,放到干燥處貯存。
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