試驗(yàn)不同樣品量、不同研磨鋼珠大小和不同研磨鋼珠數(shù)量對(duì)新鮮麥苗研磨效果的影響,從而摸索出用TL2020實(shí)驗(yàn)室小型植物粉碎機(jī)進(jìn)行小麥麥苗樣品前處理的最佳實(shí)驗(yàn)方案,為后續(xù)有效提取麥苗DNA提供保障。
材料:新鮮小麥麥苗
儀器:主機(jī),TL2020實(shí)驗(yàn)室小型植物粉碎機(jī)(又名TL2020高通量組織研磨儀,原理是水平震蕩驅(qū)動(dòng)樣品管內(nèi)的鋼珠使其與管壁或者樣品發(fā)生高頻碰撞摩擦從而實(shí)現(xiàn)樣品研磨,和刀片粉碎原理的植物粉碎機(jī)相比,更適合需要精細(xì)研磨的生物及化學(xué)實(shí)驗(yàn));配件:2ml研磨適配架,直徑1-8mm研磨鋼珠
步驟:
1)取樣:用打孔器在麥苗上取樣20-30片,或用剪刀將麥苗剪成若干小塊;
2)將小塊/小片麥苗放入一系列2ml EP管中(圓底),部分EP管中放入約0.1g, 部分EP管中放入約1g。其中,在0.1g樣品管里分別置入直徑4-8mm的鋼珠(4mm2-3顆/管,5mm1顆/管,8mm1顆/管);而1g樣品管中置入1-3顆4mm的鋼球(此時(shí)》5mm直徑鋼球會(huì)造成管內(nèi)擁擠,必然影響研磨效果,故不嘗試);
3)將以上EP管同時(shí)放入TL2020實(shí)驗(yàn)室小型植物粉碎機(jī)的2ml研磨適配架中,然后將適配架固定在研磨儀的搖臂中;
4)設(shè)置TL2020的研磨時(shí)間為5分鐘,研磨頻率1800rpm(1800次/分鐘)。
結(jié)果:
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圖1:當(dāng)樣品量過多時(shí)(>0.15g),無論置入1個(gè),2個(gè)還是3個(gè)直徑4mm的鋼珠,其研磨效果均不理想,有較多塊狀組織。 |
圖2:當(dāng)每個(gè)試管的樣品量為《0.1g左右時(shí),無論置入1顆直徑8mm鋼珠,或1顆直徑5mm鋼珠,還是2-3顆直徑4mm鋼珠,均可將麥苗樣品研磨成細(xì)泥狀。 |
結(jié)論:
研磨管中樣品的數(shù)量(重量)對(duì)研磨結(jié)果至關(guān)重要,而研磨珠的大小和數(shù)量對(duì)研磨結(jié)果不是最重要的因素,但大的研磨珠相比小研磨珠的研磨時(shí)間會(huì)縮短,越小的研磨珠研磨的細(xì)度越細(xì)。 樣品體積不得大于試管的1/3。
附:0.1g小麥麥苗的實(shí)際稱重, 可供參考
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本文關(guān)鍵詞:植物粉碎機(jī),小型植物粉碎機(jī),實(shí)驗(yàn)室小型植物粉碎