ELISPOT全名為酶聯(lián)免疫斑點檢測,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(即ELISA技術(shù)),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。其技術(shù)原理,一句話概括就是:用抗體捕獲培養(yǎng)中的細胞分泌的細胞因子,并以酶聯(lián)斑點顯色的方式將其表現(xiàn)出來。
將細胞因子特異性單克隆抗體包被于乙醇處理過的PVDF膜板上。具體板子處理和包被方法請參考: |
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將細胞加入到酶標(biāo)孔中,不同組加不同的刺激劑或者不加刺激劑。 具體細胞處理方法請參考: |
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細胞分泌的細胞因子與包被抗體結(jié)合。 |
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將多余細胞除去并洗板后,將生物素標(biāo)記的檢測抗體加入到酶標(biāo)孔中。 | ||
加入連霉親和素標(biāo)記的酶偶聯(lián)物 |
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使用酶聯(lián)免疫斑點讀板儀讀取斑點并分析。信息來源: | ||
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