黃曲霉毒素在自然界分布的黃曲霉中,約有 20%的菌株能產(chǎn)生黃曲霉毒素。其中花生、玉米、黃豆及棉籽等作物與其副產(chǎn)品易感染黃曲霉毒素,含黃曲霉毒素量較多,食入后在動物體內(nèi)主要存在于如肝臟、尿與糞便中。黃曲霉毒素是一種肝臟毒素,能引起肝細(xì)胞變質(zhì)、壞死、出血;目前,黃曲霉毒素的酶聯(lián)免疫法,免疫膠體金法等檢測方法均需要黃曲霉毒素抗原抗體。
(1)黃曲霉毒素半抗原合成(合成技術(shù)路線見下圖)
20-100mg黃曲霉毒素溶于丙酮中,10%硫酸中,于60℃攪拌反應(yīng),3h后,蒸干丙酮,用氯仿洗滌4次,蒸干后得到黃曲霉毒素半抗原。
(2)黃曲霉毒素全抗原(人工抗原、完全抗原、酶標(biāo)抗原)合成
將黃曲霉毒素半抗原與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫抗原。
取60mg牛血清白蛋白溶于9.5ml PBS(0.01mol/L,pH5.0)溶液中,加入50微升硼氫化鈉, 室溫?cái)嚢?h,用0.01mol/LPBS透析3天,每天換3次透析液,得到黃曲霉毒素與牛血清白蛋白的免疫抗原。