【摘要】  目的 不同濃度VG 氏染色液對細(xì)胞培養(yǎng)后的染色效果的研究，尋求理想的配置濃度。方法 大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）培養(yǎng)，細(xì)胞爬片，經(jīng)乙醛刺激細(xì)胞活化后，通過HE、VG 氏染色，觀察膠原纖維和肌源性成分的染色效果。結(jié)果 VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液），臨用前分別按A∶B=2∶1、1∶1、1∶2三種配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的品紅色。A∶B=1∶9配方中肌性纖維染成黃色，膠原纖維染成紅色。A∶B=5∶95、1∶99配方中兩者都染成黃色。結(jié)論 A∶B=1∶9此種染色兩種成分明顯，效果最佳,其余比例染色效果呈單一色，無鑒別作用。

【關(guān)鍵詞】  VG染色；細(xì)胞培養(yǎng)；肝星狀細(xì)胞；膠原纖維

    VG氏(Van Giesan)染色方法在病理診斷中是最常應(yīng)用的一種特殊染色，鑒定膠原纖維和肌源性成分起著重要的作用［1］。但是對細(xì)胞染色的研究報(bào)道很少，本文對不同濃度VG 氏染色液對細(xì)胞培養(yǎng)后的染色效果進(jìn)行探討，尋求理想的配置濃度。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　細(xì)胞來源于瀘州醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室的大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6），正常細(xì)胞培養(yǎng)再經(jīng)乙醛刺激24h，95％的酒精固定。VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液）；HE染液均由該實(shí)驗(yàn)中心提供。

　　1.2 方法

　　1.2.1  細(xì)胞培養(yǎng) 
　　
　　大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）經(jīng)10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基正常傳代培養(yǎng)穩(wěn)定后，細(xì)胞爬片，長至融合度70%時，0.4%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基同步化處理12h，200uM乙醛刺激24h, 95％的酒精固定。

　　1.2.2  染色

　　HE染色5～10min，稀鹽酸酒精進(jìn)行分色，淡氨水使胞核藍(lán)化3～5min，用VG染液染5～10min。棄去染液，直接用95% 酒精快速分化，用濾紙吸干。二甲苯透明，中性樹膠封固。VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液），臨用前分別按A∶B=2∶1、1∶1、1∶2、1∶9、5∶95、1∶99的比例混合使用。

　　2  結(jié) 果

    通過對國內(nèi)外染液配制比例配方中選出有代表性的6種進(jìn)行染色比較，可以看出A∶B=2∶1、1∶1、1∶2三種配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的品紅色（見圖1、2），無差異性，起不到鑒別的作用。A∶B=1∶9配方中肌性纖維染成黃色，膠原纖維染成紅色（見圖3），此染色效果最佳。A∶B=5∶95配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的黃色（見圖4）。A∶B=1∶99配方中兩者都染成黃色。故由此認(rèn)為A∶B=1∶9配方染色效果最佳。

　　3  討  論

    肝纖維化其特征為以膠原蛋白為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)合成與降解失衡。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells, HSC)是引起肝纖維化的主要細(xì)胞［2］ ，其活化、增殖是肝纖維化的關(guān)鍵事件［3］。 激活的HSC大量增殖, 發(fā)生表型改變并分泌過多的ECM沉積于肝臟是肝纖維化形成的關(guān)鍵［4］。酒精的代謝產(chǎn)物乙醛能夠有效刺激HSC活化，使P-ERK水平增加，引起ERK信號傳導(dǎo)通路活化［5］。膠原纖維是結(jié)締組織的一種組成成分，由成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生，易被酸性染料著色。Van Gieson作為傳統(tǒng)的膠原纖維染色方法之一，其配方中酸性品紅用于染膠原纖維，而苦味酸能使肌纖維黃染，染色效果鮮艷明亮，且本法不受組織固定液的限制，因而深受科學(xué)研究歡迎。本文中試探將Van Gieson染液中兩種染料按不同比例組成配方使用，目的在于探索能否根據(jù)不同組織選用不同比例配方達(dá)到不同的染色效果。經(jīng)過我們反復(fù)比較試驗(yàn)，按1%酸性品紅1份與9份苦味酸飽和水溶液混合配制而成的Van Gieson染液，染色結(jié)果膠原纖維與肌纖維顏色鮮艷且對比明顯。另外，蘇木精為組織學(xué)技術(shù)中常用的細(xì)胞核優(yōu)良染料，但蘇木精單獨(dú)使用并沒有染色作用，我們對比使用不同蘇木素染液目的在于找尋一種用于Van Gieson染色法的細(xì)胞核染液，該染液染色后不易被苦味酸褪掉。實(shí)驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合以上分析，使用Van Gieson染色法，若將酸性品紅與苦味酸按1∶9比例配制染液，并用含鐵的蘇木素染液染細(xì)胞核，可獲得較為穩(wěn)定的操作方法，且可使肌纖維、膠原纖維、細(xì)胞核的顏色對比更為突出。也可根據(jù)需要選用其他比例的Van Gieson染液。