為模擬人類PD，理想的動(dòng)物模型應(yīng)具備以下一些特點(diǎn)： (1)多巴胺能神經(jīng)元在出生時(shí)數(shù)量及形態(tài)正常，青年時(shí)期開始逐漸選擇性地減少，減少量超過(guò)50％，且容易通過(guò)神經(jīng)化學(xué)和神經(jīng)生理學(xué)的方法檢測(cè)到； (2)模型應(yīng)能容易檢測(cè)其運(yùn)動(dòng)功能的損傷，包括運(yùn)動(dòng)遲緩、肌僵直和靜止性震顫等PD的主要癥狀； (3)模型應(yīng)能顯示出路易小體的形成；(4)如果模型是遺傳性的，應(yīng)基于單一突變而使突變模型有著強(qiáng)大的傳播能力； (5)模型應(yīng)有相對(duì)較短的疾病周期(如數(shù)月)，以使藥物篩選得以經(jīng)濟(jì)、快速地進(jìn)行。

國(guó)際通用國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多是兩種方法：①通過(guò)在大鼠的黑質(zhì)或內(nèi)側(cè)前腦束注射6羥多巴胺（6-OHDA）②通過(guò)對(duì)模型動(dòng)物(如:猴、小鼠、豬等)進(jìn)行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶（MPTR）的管飼法和立體定位注射等方法。前者是較精典的模型制備的方法，也是在國(guó)內(nèi)較早開展的，但是其存在①神經(jīng)元的毀損出現(xiàn)的較早，這與臨床PD病人的中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的漸進(jìn)性死亡不同②近距離的毀損很難把握毀損的程度，這使得采用這種方法獲取部分損毀的模型的成功率很低；較之前者采用MPTP管飼法和立體定位注射方法，在國(guó)內(nèi)最近幾年才運(yùn)用到帕金森動(dòng)物模型的制備，國(guó)外已經(jīng)利用MPTR在猴和小鼠身上建立了較為理想的PD模型，制備通常采用皮下、靜脈、腹腔注射和肌肉給藥，具有方法可靠且重復(fù)性較好。但是其危險(xiǎn)性較高，對(duì)于試驗(yàn)人員和試驗(yàn)條件有著嚴(yán)格的要求。

1、模型鼠制備

1968年Ungenstdet首先報(bào)道采用6—經(jīng)多巴胺(6-OHDA)在大白鼠造成帕金森病動(dòng)物模型．該動(dòng)物旋轉(zhuǎn)模型的某些特點(diǎn)和人類賊金森病相似。近來(lái)，人們根據(jù)6—OHDA的注射部位及注射劑量不同，來(lái)造成模擬不同階段帕金森病的動(dòng)物模型。

注射6-OHDA來(lái)制備帕金森病鼠的步驟：

1）實(shí)驗(yàn)選擇體重250~300g健康雄性Wistar大鼠36只來(lái)制備帕金森氏病的大鼠模型

2）大鼠用戊巴比妥（48mg/kg）腹腔注射注射麻醉

3）解剖操作 將麻醉后的大鼠固定于江灣I型C立體定向儀上，頭部正中切口，剝離骨膜，止血。參照George圖譜，用牙科鉆在顱骨頂鉆孔，定位坐標(biāo)為：門齒與耳桿平行，前囪后3mm，旁開3.0mm，顱骨表面下9.0mm，將自制同心套管插入右側(cè)NS區(qū)(套管外徑0.7mm，內(nèi)管外徑0.4mm，內(nèi)管比外管前端1.5mm,用502膠和自凝牙托粉固定。

4) 微量注射器吸6-OHDA溶液4μL(含9.0μg 6-OHDA和8.8μg抗壞血酸)，速度為1μg／min，注射后留置4min退出，縫合皮膚。

5) 21天參照參照Francois的實(shí)驗(yàn)方法 (包括行動(dòng)遲緩實(shí)驗(yàn)、抓握實(shí)驗(yàn)和尾強(qiáng)直實(shí)驗(yàn)記錄強(qiáng)直癥狀的變化、震顫實(shí)驗(yàn))記錄帕金森氏病的三大癥狀．并記錄肌電圖變化，以鑒別大鼠模型建立是否成功。判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：①出現(xiàn)行動(dòng)遲緩實(shí)驗(yàn)持續(xù)35min②抓握實(shí)驗(yàn)持續(xù)55 min、尾強(qiáng)直實(shí)驗(yàn)持續(xù)30min③震顫頻率在48次／min以上和肌電圖群放電位頻率在4-8次／s。

2、應(yīng)用6-OHDA制備偏側(cè)PD鼠模型

1) 雄性Sprague-Dawley大鼠，體重230一250g

2) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉后，固定于立體定向儀(江灣I型C)上。

3) 參照大鼠腦立體定位圖譜,取兩個(gè)靶點(diǎn)a點(diǎn):前囟尾側(cè)5.0mm，中線右側(cè)1.9mm,硬腦膜腹側(cè)7.4mm；b點(diǎn)：前囟尾側(cè)5．3mm，中線右側(cè)2.5mm,硬腦膜腹側(cè)6.5mm)。將12μg 6-OHDA(Sigma公司)立體定向注射于右側(cè)黑質(zhì)a、b兩個(gè)靶點(diǎn)(每點(diǎn)注射量6μg，濃度2μg／μl，溶解于含0.1%抗壞血酸的生理鹽水中)。注射速度0.3μl／min．注畢留針15min。

4) 行為檢測(cè) 模型建立3周后，用阿樸嗎啡(apomnphine，APO)按0.25mg／kg誘發(fā)大鼠向左側(cè)(未損傷側(cè))旋轉(zhuǎn)，記錄半小時(shí)內(nèi)旋轉(zhuǎn)次數(shù)，選210轉(zhuǎn)／30min(7轉(zhuǎn)／min)以上的動(dòng)物為成功PD模型

應(yīng)用1-甲基-4-苯基－1,2,3,6四氫吡啶制備PD動(dòng)物模型

3、靈長(zhǎng)類PD模型

恒河猴在戊巴比妥(40mg／kg)腹腔麻醉下，切開頸部皮膚，經(jīng)鈍性分離暴露一側(cè)頸總動(dòng)脈。對(duì)動(dòng)物行頸總動(dòng)脈注射，即將新鮮配制的MPTP(Sigma)按1.0—1.5mg／kg體重溶于2mL生理鹽水中，逆血流方向緩慢注入血管中。若動(dòng)物在第1次手術(shù)后PD癥狀不明顯，故分別在每隔5d后又給予第2—4次注射，直至PD癥狀出現(xiàn)。用MPTP建立的靈長(zhǎng)類雙側(cè)及偏側(cè)PD模型，在癥狀、體證、病理、生化、對(duì)藥物治療的反應(yīng)方面與人類PD的特征極為相似，被認(rèn)為是最具代表性的PD動(dòng)物模型。

4、MPTP用于帕金森病小鼠模型制作

小鼠對(duì)MPTP的敏感性存在種系和年齡的差異。一般選10~12周齡，體重25~30g成年C57BL褐鼠，按體重30~40 mg／kg腹腔注射MPTP，連續(xù)7d。于第6~7次注射后出現(xiàn)暫時(shí)性(2~3h)軀干震額、豎毛、尾巴過(guò)伸、動(dòng)作減少及爬桿試驗(yàn)障礙。

5、MPTP用于舶金森病小國(guó)模型制作時(shí)的一些注意

C57BL小鼠對(duì)MPTP最為敏感，而CF-W小鼠、FVB／N小鼠和Balb/C小鼠對(duì)MPTP的敏感性較C57BL小鼠稍差，CF-1和CD-1對(duì)MPTP的敏感性最差。目前較常用的小鼠為C57BL/6小鼠

b)  鼠齡對(duì)MPTP敏感性的影響

老齡鼠較青年鼠對(duì)MFTP更為敏感，這種敏感性的差異不僅表現(xiàn)在順處理后的老齡鼠能夠呈現(xiàn)更為明顯的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目的減少，而且還能在順處理后的老齡鼠身上觀察到藍(lán)斑區(qū)腎上腺紊能神經(jīng)元數(shù)目的減少以及較典型的帕金森病行為學(xué)方面的改變

6、帕金森病小鼠模型行為學(xué)改變的定量觀察

1）  爬桿試驗(yàn)

2）  懸掛實(shí)驗(yàn)

3）  游泳實(shí)驗(yàn)

以上幾種定量觀察法為帕金森病小鼠模型行為學(xué)的研究提供了一些較為準(zhǔn)確和客觀的方法，同時(shí)也提高了整個(gè)實(shí)驗(yàn)的客觀性。

7、其他建立模型的方法

1）利血平模型 利血乎主要可以通過(guò)抑制去甲腎上腺素能神經(jīng)元末梢的再攝取功能，使囊泡內(nèi)貯存的多巴胺(DA)及其他的兒茶酚胺類遞質(zhì)耗竭。將雄性Wistar大鼠(體重280—300g)腹腔內(nèi)注射一定劑量的利血平后可使其出現(xiàn)骨傷肌慢硬、震顫、身體屈曲、運(yùn)動(dòng)過(guò)少以及其他的一些運(yùn)動(dòng)癥狀。神經(jīng)化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)大鼠紋狀體內(nèi)DA和其他單胺類遞質(zhì)的含量明顯減少。因此．這類模型在一定程度上模擬了PD的臨床表現(xiàn)和神經(jīng)化學(xué)改變。但它存在明顯的不足：一是藥物注射造成的運(yùn)動(dòng)障礙在不同時(shí)間和不同個(gè)體之間變異性較大；二是利血乎同時(shí)引起了多種遞質(zhì)釋放并且無(wú)法造成類似PD的病理改變。因此該模型的應(yīng)用只局限于探索藥物影響肌僵狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)其他的運(yùn)動(dòng)癥狀的研究現(xiàn)已很少應(yīng)用。

2）Fe³⁺模型 1991年Ben-Shachar在雄性SD大鼠(250~300g)單側(cè)黑質(zhì)內(nèi)注射Fe³⁺三周后可使其出現(xiàn)明顯的運(yùn)動(dòng)行為改變，表現(xiàn)為在新環(huán)境中自主運(yùn)動(dòng)減少，短暫的僵直癥狀及自發(fā)的同測(cè)旋轉(zhuǎn)行為。安菲它明(AMPH)可使這種同測(cè)旋轉(zhuǎn)行為加強(qiáng)。神經(jīng)化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)同側(cè)紋狀體DA含量平均減少95％，并且其代謝產(chǎn)物3，4—二羥基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量也明顯減低。組織病理學(xué)證實(shí)酪氨酸經(jīng)化酶(TH)免疫染色陽(yáng)性細(xì)胞大量減少，同時(shí)膠質(zhì)細(xì)胞增生活躍。

3）機(jī)械損傷模型 研究發(fā)現(xiàn)機(jī)械損傷內(nèi)側(cè)前肋束(MF可以造成黑質(zhì)內(nèi)的DA能神經(jīng)元進(jìn)行性死亡。已經(jīng)建立的造模方法有MFB獨(dú)突切斷術(shù)和中腦半切術(shù)，尤以前者應(yīng)用較多。MFB切斷術(shù)損傷模型的建立需要在大鼠腦立體定位儀上準(zhǔn)確定住后，用特制的Scouten電線刀深入到MFB所在的部位將其切斷。Brechne用此方法切斷雄性CFHB大鼠(150～180g)的MFB后，分別于第1，2，4，6，10，16周計(jì)數(shù)DA能神經(jīng)元的存活數(shù)目，發(fā)現(xiàn)約28％的黑質(zhì)(SN)神經(jīng)元在一周左右死亡，10周后約70％的細(xì)胞死亡。平均SN神經(jīng)元存活數(shù)是29％。逆行追蹤顯示MFB切斷成功率為92％～99％�？梢姡�用該方法造模有如下優(yōu)點(diǎn)：①成功率高，較為經(jīng)濟(jì)。②黑質(zhì)DA能神經(jīng)元呈現(xiàn)漸進(jìn)性死亡，可以模擬PD病理變化的全過(guò)程，對(duì)于研究神經(jīng)元的再生和PD的預(yù)防有一定的意義。缺點(diǎn)是切斷術(shù)后短時(shí)間內(nèi)，損傷的程度不穩(wěn)定。