實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)方法
1)
動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境1周后,稱重,禁食24小時(shí)。此后每天八臂迷宮訓(xùn)練結(jié)束后限制性地給予正常食料(據(jù)體重不同,大鼠16-20g,小鼠2-3g),以使體重保持在正常進(jìn)食大鼠的80%~85%。
2)
第二天,迷宮各臂及中央?yún)^(qū)分撒著食物顆粒(每只4~5粒,直徑約3~4mm)。然后,同時(shí)將4只動(dòng)物置于迷宮中央(通往各臂的門打開(kāi))。讓其自由攝食、探究10min。
3)
第三天,重復(fù)第二天的訓(xùn)練。這一過(guò)程讓動(dòng)物在沒(méi)有很強(qiáng)的應(yīng)激條件下熟悉迷宮環(huán)境。
4)
第四天起,動(dòng)物單個(gè)進(jìn)行訓(xùn)練:在每個(gè)臂靠近外端食盒處各放一顆食粒,讓動(dòng)物自由攝食。食粒吃完或10min后將動(dòng)物取出。
5) 第五天,將食物放在食盒內(nèi),重復(fù)前一天的訓(xùn)練,一天2次。
6)
第六天以后,隨機(jī)選4個(gè)臂,每個(gè)臂放一顆食粒;八臂迷宮各臂門關(guān)閉,將動(dòng)物放在迷宮中央;30s后,臂門打開(kāi),讓動(dòng)物在迷宮中自由活動(dòng)并攝取食粒,直到動(dòng)物吃完所有4個(gè)臂的食粒。如經(jīng)10min食粒仍未吃完,則實(shí)驗(yàn)終止。每天訓(xùn)練兩次,其間間隔1h以上。
Xmaze動(dòng)物行為學(xué)軟件會(huì)自動(dòng)記錄以下4個(gè)指標(biāo):1工作記憶錯(cuò)誤(working memory
errors)2參考記憶錯(cuò)誤(reference memory errors
);3總的入臂次數(shù);4測(cè)試時(shí)間,即動(dòng)物吃完所有食粒所花的時(shí)間。
A. 傳統(tǒng)T-形迷宮實(shí)驗(yàn)
(1)適應(yīng) 在T-形迷宮臂內(nèi)分撒6粒食丸(45g),讓大鼠適應(yīng)迷宮5min,每天一次,連續(xù)5天。
(2)強(qiáng)迫選擇訓(xùn)練
將大鼠放入主干臂的起始箱,打開(kāi)閘門,讓大鼠進(jìn)入迷宮的主干臂。隨機(jī)、交替選擇左右兩臂之一放入4粒食丸,同時(shí)關(guān)閉另一臂,使動(dòng)物被迫選擇食物強(qiáng)化臂并完成攝食;每天6次,連續(xù)4天。
(3)延遲位置匹配(delayed matching-to-position,DMP)訓(xùn)練
a)將動(dòng)物放入閘門關(guān)閉的起始箱,打開(kāi)閘門,讓動(dòng)物進(jìn)入主干臂。
b)關(guān)閉一側(cè)目標(biāo)臂,強(qiáng)迫動(dòng)物進(jìn)入另一側(cè)開(kāi)放臂以獲得2粒食丸獎(jiǎng)賞。
c)立即(最短延遲,少于5s)將動(dòng)物放回主干臂,開(kāi)始匹配訓(xùn)練中的第二次訓(xùn)練;此時(shí)兩個(gè)目標(biāo)臂均開(kāi)放。動(dòng)物將兩前肢和至少兩后肢的一部分置于一個(gè)目標(biāo)臂時(shí)完成“一次選擇”。動(dòng)物返回到強(qiáng)迫選擇訓(xùn)練時(shí)進(jìn)入過(guò)的臂則獲得食物獎(jiǎng)賞(4粒食丸),記錄一次正確選擇;若動(dòng)物進(jìn)入另一臂,則沒(méi)有食物獎(jiǎng)賞,并且將其限制在該臂內(nèi)10秒,記錄一次錯(cuò)誤選擇。
(4)一次匹配訓(xùn)練結(jié)束后將動(dòng)物放回籠內(nèi)5~10min(與此同時(shí)訓(xùn)練其他動(dòng)物),再重復(fù)下一次匹配訓(xùn)練。每天8次。
動(dòng)物連續(xù)兩天的正確選擇次數(shù)達(dá)到15/16,則認(rèn)為達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),可以開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。如動(dòng)物經(jīng)過(guò)30天訓(xùn)練仍然達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn),則予以淘汰。
(5)動(dòng)物訓(xùn)練達(dá)標(biāo)后一天,給予一次匹配訓(xùn)練。所不同的是,強(qiáng)迫選擇訓(xùn)練后,將T-形迷宮旋轉(zhuǎn)180度,再進(jìn)行上述開(kāi)放臂的訓(xùn)練。這樣做的目的是評(píng)價(jià)動(dòng)物是否為定位性操作(有賴于迷宮外信號(hào))或反應(yīng)性操作(不依賴迷宮外信號(hào))。
(6)接著兩天,每天給予10次匹配訓(xùn)練,每次訓(xùn)練間隔為60s,用以評(píng)價(jià)動(dòng)物的工作記憶操作。記錄進(jìn)入食物強(qiáng)化臂的次數(shù)和再次進(jìn)入非強(qiáng)化臂的次數(shù)。后者被認(rèn)為是工作記憶錯(cuò)誤。正常健康年輕的大鼠幾乎每次均能準(zhǔn)確操作。當(dāng)操作穩(wěn)定、且選擇準(zhǔn)確率高(工作記憶錯(cuò)誤少于10%)時(shí),可進(jìn)行藥物測(cè)試或腦區(qū)毀損后的操作實(shí)驗(yàn)。