腦立體定位儀實(shí)驗(yàn)使用方法 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?span id="5u59trqh" class=Apple-converted-space> 1. 了解腦立體定位技術(shù)。 2. 掌握腦立體定位儀及腦圖譜的使用方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理 腦立體定位技術(shù)被廣泛的運(yùn)用于腦的損毀、刺激和腦電記錄的精確定位中,成為研究腦結(jié)構(gòu)和功能必不可少的工具。腦立體定位技術(shù)主要是使用腦立體定位儀作為定位儀器,利用某些顱骨外面的標(biāo)志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等)或其它參考點(diǎn)所規(guī)定的三度坐標(biāo)系統(tǒng),來確定皮層下某些神經(jīng)結(jié)構(gòu)的位置,以便在非直視暴露下對(duì)其進(jìn)行定向的刺激、破壞、注射藥物、引導(dǎo)電位等研究,是神經(jīng)解剖、神經(jīng)生理、神經(jīng)藥理和神經(jīng)外科等領(lǐng)域內(nèi)的重要研究方法。常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,如大鼠、小鼠、貓等高等哺乳動(dòng)物以及鳥類,其均有完全的外耳道,可用(耳棒)來定位。在確定了顱外標(biāo)記之后,就可按腦立體定位圖譜所提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行定位操作。 三、實(shí)驗(yàn)器材 ZS-B腦立體定位儀(規(guī)格參數(shù)參考網(wǎng)站:),MC-5微操作儀,常規(guī)手術(shù)器械,鉆孔針,紗布,干棉球,酒精,0.4%戊巴比妥鈉(麻醉劑,現(xiàn)配現(xiàn)用),生理鹽水,1ml注射器,3%雙氧水, 小白鼠。 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1.腦定位儀的使用
1.1 校驗(yàn)儀器
定位儀經(jīng)過搬動(dòng)或長(zhǎng)期不用后,使用前需先加以校驗(yàn)。重點(diǎn)是檢驗(yàn)電極移動(dòng)架各滑尺是否保持直角,可用三角板測(cè)定各滑尺所成的角度是否是直角;各銜接部與螺絲有沒有松動(dòng);滑尺是否太松;檢查主框兩臂的平行情況;最后觀察固定頭的裝置兩側(cè)對(duì)稱程度,小框是否與主框平行。檢查儀器無故障后,可進(jìn)行下列校驗(yàn)性操作:
(1)將兩側(cè)耳桿柱旋松,在主框上前后滑動(dòng),然后再按照原規(guī)定刻度裝好,看兩側(cè)耳桿尖是否完全對(duì)正。
(2)取下一側(cè)耳桿,將一側(cè)電極移動(dòng)架裝好,前后左右上下移動(dòng)各滑尺,使裝在電極夾上的金屬定位針尖正對(duì)耳桿尖的中心,記下各滑尺的刻度讀數(shù),再卸下移動(dòng)架再裝上,并按上法測(cè)定耳桿尖的部位,記下三個(gè)滑尺的讀數(shù),反復(fù)操作取平均數(shù)首先將放置水平的腦立體定位儀上的兩個(gè)滑道,按實(shí)驗(yàn)的要求調(diào)節(jié)好合適的高度后。
(3)然后再用水平尺調(diào)正好兩個(gè)滑道的前后、左右水平。這時(shí)再把安置在滑道上的手動(dòng)微推進(jìn)器按上面的刻度調(diào)節(jié)垂直。
1.2 確定腦立體定位零點(diǎn),小鼠腦定位的系統(tǒng)大致分兩種:
(1) 用耳間線中心定位,首先將兩個(gè)耳棒尖端在定位儀滑道中間部位彼此相接觸(兩個(gè)耳棒讀數(shù)相同),旋緊鏍絲。然后取下一側(cè)耳棒,另一耳棒不動(dòng)。調(diào)節(jié)移動(dòng)推進(jìn)器,使校驗(yàn)電極尖端與耳棒尖端的中心點(diǎn)相觸,即為A點(diǎn)(即耳間線中心點(diǎn)),并記下刻度值。然后,將推進(jìn)器水平移動(dòng)到門齒鉤的上方,將門齒鉤平面與校驗(yàn)電極尖端相觸。這時(shí)就定出外耳道中心點(diǎn)與門齒牙板上面上沿之間的水平切面0點(diǎn),記為H0。這時(shí),動(dòng)物的前囟和后囟基本處在一個(gè)水平面上,相差0-0.1mm。另外,規(guī)定耳間線中心點(diǎn)以上為+,向下為-;向嘴側(cè)為+,向尾側(cè)為-。
(2)用顱骨標(biāo)志定位(常用前囟),即以前囟為嘴尾側(cè)0點(diǎn),由前囟向嘴側(cè)為+,向尾側(cè)為-,其它與上面定位方法相同(圖示)。
2. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
(1)動(dòng)物麻醉:小鼠,體重20-30g,稱重后以0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉注射時(shí)必須緩慢,隨時(shí)注意動(dòng)物狀態(tài)。
(2)小鼠頭部固定:將小鼠的門齒固定于腦定位儀上頜固定器,然后把一側(cè)的耳捧推入動(dòng)物的外道后,使動(dòng)物的頭在處于兩滑道正中。再將另一耳捧推入另一側(cè)的外耳道。這時(shí)觀察兩個(gè)耳棒的刻度一致后,將兩耳棒上的固定螺絲扭緊,在將牙齒固定器上壓鼻環(huán)壓下后扭緊(鼻環(huán)、耳棒的松緊度調(diào)節(jié)適宜為好),這時(shí)從各個(gè)方向推壓動(dòng)物頭部"均不會(huì)出現(xiàn)移動(dòng)。
(3)開顱鉆孔前的備皮:剪去動(dòng)物頭部毛,用2%碘酒及75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒,沿矢狀縫作一3cm長(zhǎng)的皮膚切口,分離皮下組織,用雙氧水清潔顱骨表面的筋膜及肌肉并剝離,推開骨膜,暴露前囟、人字縫及矢狀縫。
(4)確定標(biāo)準(zhǔn)中線:將金屬定位針向下移動(dòng)到矢狀縫上方后,再前后移動(dòng)定位針,使定位針定位到前囟。
(5)小鼠海馬定位:用定位針在前囟后2mm, 矢狀縫旁開2.5mm處定位一點(diǎn),即為海馬的平面位置,然后在此點(diǎn)上用鉆孔針在顱骨上鉆一小圓孔。
(6)注射藥物:小鼠海馬則位于該圓孔下2 mm,將1ml注射器吸入藥物安置到MC-5微操作儀上,操作儀器使注射器針頭由小鼠腦鉆孔處下降2mm時(shí)完成藥物注射到小鼠腦海馬處。
(7)制作腦組織切片:將小鼠腦制作成切片,顯微觀察小鼠腦中紅染料位置來驗(yàn)證小鼠腦海馬中是否定位準(zhǔn)確。
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