改善記憶作用檢驗(yàn)方法

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1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
1.1跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)
1.1.1原理
反應(yīng)箱底鋪有通36v電的銅柵，動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺(tái)以避免傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)，如此訓(xùn)練5min，并記錄每鼠受到電擊的次數(shù)或叫錯(cuò)誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h或48h重作測(cè)驗(yàn)，此即記憶保持測(cè)驗(yàn)。記錄受電擊的動(dòng)物數(shù)、第一次跳下平臺(tái)的潛伏期和3min內(nèi)的錯(cuò)誤總數(shù)。停止訓(xùn)練5天后（也可以在訓(xùn)練后的一周、兩周或其它時(shí)間點(diǎn)）進(jìn)行記憶消退實(shí)驗(yàn)。
1.1.2儀器與試劑
跳臺(tái)儀：該裝置為10×10×60cm3的被動(dòng)回避條件反射箱，用黑色塑料板分隔成5間。底面鋪以銅柵，間距為0.5cm，可以通電，電壓強(qiáng)度由一變壓器控制。每間左后角置一高和直徑均為4.5cm的絕緣平臺(tái)。
試劑：樟柳堿、環(huán)已酰亞胺、乙醇。
1.1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.1.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斷乳鼠，體重10g左右；或成年鼠，體重18-22g用于改善老年人記憶的產(chǎn)品必須采用成年鼠。雌雄均可，單一性別不少于10只（最后有效數(shù)據(jù)）。推薦使用近交系小鼠。
1.1.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組
共設(shè)高、中、低、對(duì)照四個(gè)組，根據(jù)推薦的人體每日每公斤體重?cái)z入量，擴(kuò)大10倍作為其中一個(gè)劑量組，根據(jù)受試樣品的具體情況另設(shè)兩個(gè)劑量組。經(jīng)口給樣。原則上連續(xù)給樣30天，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行設(shè)定給樣期限。
1.1.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟
1.1.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響
末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開(kāi)始訓(xùn)練。將動(dòng)物放入反應(yīng)箱內(nèi)（臺(tái)上、臺(tái)下）適應(yīng)環(huán)境3min，然后將動(dòng)物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上，立即通以36v的交流電。動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)（絕緣體），以躲避傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)上。訓(xùn)練一次后，將動(dòng)物放在反應(yīng)箱內(nèi)的平臺(tái)上，記錄5min內(nèi)各鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和第一次跳下平臺(tái)的潛伏期，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)（記憶獲得）。24或48h后進(jìn)行重測(cè)驗(yàn)，將小鼠放在平臺(tái)上，記錄各鼠第一次跳下平臺(tái)的潛伏期、各鼠3min內(nèi)電擊次數(shù)和受電擊的動(dòng)物數(shù)總數(shù)，同時(shí)計(jì)算出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動(dòng)物的百分率（受電擊的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分率）（記憶鞏固）。停止訓(xùn)練5天后（包括第5天）可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)，方法同重測(cè)驗(yàn)）。
1.1.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響
1.1.3.3.2.1模型制造
記憶獲得障礙模型制造：訓(xùn)練前10min腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿5mg/kg體重；
記憶鞏固障礙模型制造：訓(xùn)練前10min腹腔注射環(huán)已酰亞胺120mg/kg體重；
記憶再現(xiàn)障礙模型制造：重測(cè)驗(yàn)前30min灌胃30%的乙醇0.1mL/10g體重；
1.1.3.3.2.2記憶測(cè)試的操作方法：同1.1.3.3.1
1.1.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定
潛伏期結(jié)果為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值錯(cuò)誤次數(shù)和3min內(nèi)跳下平臺(tái)的動(dòng)物均為記數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。
若受試樣品組與對(duì)照組比較，潛伏期明顯延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺(tái)的動(dòng)物明顯少于對(duì)照組，差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中，任一階段（記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)）的任一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。
1.1.5注意事項(xiàng)
1.1.5.1動(dòng)物在24h內(nèi)有其活動(dòng)周期，不同時(shí)相處于不同的覺(jué)醒水平，故每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇同一時(shí)間（上午8-12點(diǎn)或下午1-4點(diǎn)），前后2天的實(shí)驗(yàn)要在同一時(shí)間內(nèi)完成。
1.1.5.2實(shí)驗(yàn)應(yīng)在隔音，光強(qiáng)度和溫、濕度適宜且保持一致的行為實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
1.1.5.3推薦使用純系動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)前數(shù)天將動(dòng)物移至實(shí)驗(yàn)室以適應(yīng)周圍環(huán)境。
1.1.5.4實(shí)驗(yàn)者必須每天與動(dòng)物接觸，如：喂水、喂食和撫摸動(dòng)物。
1.1.5.5減少非特異性干擾，如情緒、注意、動(dòng)機(jī)、覺(jué)醒、運(yùn)動(dòng)活動(dòng)水平、應(yīng)激和內(nèi)分泌等因素。
1.1.5.6考慮動(dòng)物種屬差異。

1.2避暗法
1.2.1原理
利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊，計(jì)時(shí)自動(dòng)停止。
1.2.2儀器和試劑
避暗儀：該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm，其上方約20cm處懸一40w鎢燈絲。暗室較大，大小17cm×4.5cm，兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般40v電壓。暗室與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。
試劑：樟柳堿、環(huán)已酰亞胺、乙醇。
1.2.3實(shí)驗(yàn)方法
1.2.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同1.1.3.1
1.2.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組同1.1.3.2
1.2.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟
1.2.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響
末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開(kāi)始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室，同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。動(dòng)物穿過(guò)洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計(jì)時(shí)器自動(dòng)停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間，此即潛伏期，訓(xùn)練5min，并記錄5min內(nèi)的電擊次數(shù)（記憶獲得）。24h或48h后重作測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，并計(jì)算5min內(nèi)進(jìn)入暗室（錯(cuò)誤反應(yīng)）的動(dòng)物百分率（記憶鞏固）。停止訓(xùn)練5天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)）。
1.2.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響：
1.2.3.3.2.1模型制造：方法同1.1.3.3.2.1
1.2.3.3.2.2操作方法：同1.2.3.3.1
1.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定
潛伏期時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 5min內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)和5min內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)均為計(jì)數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。
若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，5min內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或5min內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)少于對(duì)照組，且差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一階段（記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)）的任一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。
1.2.5注意事項(xiàng)：同1.1.5

1.3穿梭箱實(shí)驗(yàn)（雙向回避實(shí)驗(yàn)）
1.3.1原理：條件反射
1.3.2儀器與試劑
儀器：大鼠穿梭箱。該裝置由實(shí)驗(yàn)箱和自動(dòng)記錄打印裝置組成。實(shí)驗(yàn)箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒，箱底中央部有一高1.2cm擋板，將箱底部分隔成左右兩則。實(shí)驗(yàn)箱頂部有淘汰和蜂鳴音控制器，自動(dòng)記錄打印裝置可連續(xù)自動(dòng)記錄動(dòng)物對(duì)電刺激（燈光或/和蜂鳴器）的反應(yīng)和潛伏期，并將結(jié)果打印出來(lái)。
試劑：樟柳堿，環(huán)已酰亞胺，乙醇
1.3.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar或SD大鼠，斷乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。
1.3.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組同1.1.3.2
1.3.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟
1.3.3.3.1受試樣品對(duì)正常大鼠條件反射建立的影響
將大鼠放入箱內(nèi)任何一側(cè)，20s后開(kāi)始呈現(xiàn)燈光或蜂鳴音，持續(xù)20s，后10s內(nèi)同時(shí)給以電刺激（100v，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭電擊后即逃避，必須跑到對(duì)側(cè)頂端，擋住光電管后才可中斷電擊，此為被動(dòng)回避反應(yīng)，在每次電擊前給予條件刺激，反復(fù)強(qiáng)化后，大鼠在接受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊，此為主動(dòng)回避反應(yīng)，每隔一天訓(xùn)練一回，每回50次，連續(xù)訓(xùn)練4-5回后，動(dòng)物的主動(dòng)回避反應(yīng)率可達(dá)80-90%以上。根據(jù)打印結(jié)果分析如下指標(biāo)：動(dòng)物反應(yīng)次數(shù)，動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物被動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物主動(dòng)回避率。停止訓(xùn)練5-50天內(nèi)，分2-3次測(cè)定其記憶消退情況。
1.3.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型大鼠條件反射建立的影響
1.3.3.3.2.1模型制造：同1.1.3.3.2.1
1.3.3.3.2.2操作方法：同1.3.3.3.1
1.3.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定
動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間和被動(dòng)回避時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值若實(shí)驗(yàn)組主動(dòng)和/或被動(dòng)回避時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異有顯著性，可判定為該指標(biāo)陽(yáng)性。
1.3.5注意事項(xiàng)：同1.1.5。

1.4水迷宮實(shí)驗(yàn)
1.4.1原理
動(dòng)物都有一種“探索”和“更替”傾向，當(dāng)離開(kāi)一個(gè)臂時(shí)，總是跑向“久”未跑過(guò)的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而尋找能爬出水面的階梯，訓(xùn)練后，小鼠能記住找到階梯的路線。
1.4.2儀器與試劑
水迷宮自動(dòng)記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動(dòng)記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成，長(zhǎng)100cm、寬100cm、高30cm；內(nèi)徑長(zhǎng)90cm、寬90cm、高30cm，永道寬12cm，泳道走向固定。見(jiàn)附圖。
1.4.3實(shí)驗(yàn)方法
1.4.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物推薦使用純系小鼠，斷乳鼠或成年鼠，雌雄均可。
1.4.3.2劑量設(shè)置、給樣途徑和期限均同1.1.3.2
1.4.3.3實(shí)驗(yàn)方法
1.4.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響連續(xù)給樣30天，末次給樣次日開(kāi)始訓(xùn)練。訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣，每天一次。迷宮泳道水深9cm，水溫約20℃（≥15℃）。將小鼠訓(xùn)練時(shí)間限定為120s，在120s內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠均記為120s。
第一次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，使其自動(dòng)爬上3次。以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，背朝樓梯，使其自動(dòng)爬上1次。實(shí)驗(yàn)分階段進(jìn)行，視動(dòng)物學(xué)習(xí)成績(jī)逐步加長(zhǎng)路程。第一次訓(xùn)練時(shí)用一擋板在A處擋死，從A處開(kāi)始訓(xùn)練，記錄從A點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。第二次訓(xùn)練加長(zhǎng)路程，從B處開(kāi)始，此路程約訓(xùn)練3次，至動(dòng)物數(shù)80%以上在2min內(nèi)達(dá)到終點(diǎn)后再延長(zhǎng)路程，分別記錄各鼠每次從B點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)（進(jìn)入任何一個(gè)盲端一次均算一次錯(cuò)誤）。末次測(cè)試從起點(diǎn)進(jìn)行，將小鼠放在起點(diǎn)，記錄從起點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)。每次訓(xùn)練時(shí)，對(duì)2min內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠，應(yīng)引導(dǎo)其到達(dá)終點(diǎn)，從終點(diǎn)的樓梯上來(lái)，達(dá)到訓(xùn)練的目的。每次訓(xùn)練或測(cè)驗(yàn)時(shí)均將頭朝超始點(diǎn)。最后計(jì)算各組動(dòng)物5次訓(xùn)練和測(cè)試的總錯(cuò)誤次數(shù)，到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間及2min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的總動(dòng)物數(shù)（百分率），（包括了記憶獲得和記憶鞏固兩個(gè)階段的成績(jī)）。停止訓(xùn)練5天后可在不同的時(shí)間從起點(diǎn)進(jìn)行消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)）。
1.4.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響
1.4.3.3.2.1模型制造方法：同1.1.3.3.2.1
1.4.3.3.2.2操作方法：同1.4.3.3.1
1.4.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定
到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間屬計(jì)量資料，可采方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)（百分率）兩指標(biāo)為計(jì)數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。
試驗(yàn)組與對(duì)照組比，試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對(duì)照組，或2min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)明顯多于對(duì)照組，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)任意階段的任一項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性，可判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。
1.4.5注意事項(xiàng)
1.4.5.1訓(xùn)練時(shí)在目標(biāo)區(qū)（終點(diǎn)）停留的時(shí)間不能太短，否則推動(dòng)強(qiáng)化效果。
1.4.5.2每天訓(xùn)練結(jié)束后，要對(duì)實(shí)驗(yàn)箱進(jìn)行清洗，以清除動(dòng)物留下的氣味。
1.4.5.3實(shí)驗(yàn)前可對(duì)動(dòng)物進(jìn)行初篩，經(jīng)訓(xùn)練后，2min內(nèi)仍不能游至終點(diǎn)者淘汰。
1.4.5.4其余同1.1.5。
記憶測(cè)試指標(biāo)一覽表

測(cè)試項(xiàng)目

評(píng)價(jià)指標(biāo)
所用儀器

被動(dòng)回避跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)
被動(dòng)回避時(shí)間、錯(cuò)誤次數(shù)和動(dòng)物出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)百分率
跳臺(tái)儀

避暗實(shí)驗(yàn)
同上
避暗儀

主動(dòng)回避
單向回避實(shí)驗(yàn)
達(dá)標(biāo)所需的訓(xùn)練次數(shù)
穿梭箱

雙向回避實(shí)驗(yàn)
回避時(shí)間和回避率
穿梭箱

迷宮試水迷宮實(shí)驗(yàn)
到達(dá)安全臺(tái)的時(shí)間和達(dá)標(biāo)所需的訓(xùn)練次數(shù)、動(dòng)物出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動(dòng)物百分率
水迷檢驗(yàn)

1.5結(jié)果判定
跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽(yáng)性），可以判定為該受試樣品改善記憶作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。

2人體試食試驗(yàn)
2.1改善記憶的保健食品人體試食試驗(yàn)的一般原則
2.1.1受試樣品進(jìn)行人體試食試驗(yàn)，受試樣品必須有其來(lái)源、組成、加工工藝和衛(wèi)生條件的詳細(xì)說(shuō)明，必須先經(jīng)毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)，證明安全無(wú)毒，也不存在任何潛在的危險(xiǎn)因素；經(jīng)動(dòng)物功效實(shí)驗(yàn)已證明有效，或者雖然動(dòng)物實(shí)驗(yàn)無(wú)效，但有大量背景資料證明確有改善人體記憶作用，在此基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行人體試食試驗(yàn)。
2.1.2受試者：參加人體試食試驗(yàn)的受試者應(yīng)本著自覺(jué)自愿的原則。
2.1.3主試者：本試驗(yàn)的主試人員應(yīng)以保障受試者的健康為前提，對(duì)受試者高度負(fù)責(zé)。主試者應(yīng)與受試者一起服用受試樣品。主試人員必須經(jīng)過(guò)專門的培訓(xùn)，取得結(jié)業(yè)證書(shū)后方可進(jìn)行該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

2.2選擇受試者的原則
2.2.1從比較集中、各方面影響因素大致相同的群體中挑選受試者，比如學(xué)校、部隊(duì)或其它群體。參加人體試食試驗(yàn)的受試者應(yīng)本著自覺(jué)自愿的原則。
2.2.2文化程度基本一致（均選有文化的人或均選無(wú)文化的人）
2.2.3屬同一年齡組，如不在同一年齡組，則應(yīng)對(duì)量表分進(jìn)行校正
2.2.4未接受過(guò)類似測(cè)試
2.2.5 6個(gè)月以內(nèi)未服用過(guò)與改善記憶有關(guān)的藥品或保健食品
2.3受試樣品的劑量和使用方法：按照生產(chǎn)廠家推薦的服用量和服用方法服用。
2.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)和分組
2.4.1試驗(yàn)原則：對(duì)照、雙盲、隨機(jī)
2.4.2對(duì)照：記憶測(cè)試是一種心理測(cè)試，易受遷移學(xué)習(xí)和心理暗示的影響，第二次測(cè)驗(yàn)的記憶商一般比第一次高，有時(shí)對(duì)照組前后兩后測(cè)試的記憶商差異有顯著性。因此，不能僅以服樣前后自身比較的結(jié)果下結(jié)論，必須設(shè)置平行對(duì)照。
2.4.3雙盲：對(duì)照組必須服用安慰劑（不含有效成份，但其劑型、色澤、外觀、口感、包裝等均受試樣品相同），以消除心理暗示的影響；主試者在施測(cè)時(shí)不知道誰(shuí)服樣品，誰(shuí)服安慰劑，以消除主試者主觀偏向的影響，保證測(cè)試結(jié)果客觀可靠。
2.4.4同一受試者前后兩次測(cè)試由同一主試者進(jìn)行，
2.4.5施測(cè)順序一般是先聽(tīng)覺(jué)測(cè)驗(yàn)后視覺(jué)測(cè)驗(yàn)。具體測(cè)驗(yàn)順序是：（1）指向記憶，（2）聯(lián)想學(xué)習(xí)，（3）無(wú)意義圖形再認(rèn)。（4）圖象自由回憶。（5）人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶。
2.4.6分組方法：服樣前對(duì)受試者進(jìn)行第一次記憶商測(cè)試后，然后按記憶商隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如文化水平、年齡等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間可比性。每組受試者不少于50例。
2.4.7受試樣品的劑量和使用方法：試食組按樣品推薦劑量和方法服用受試樣品，對(duì)照組服用安慰劑。觀察時(shí)間不少于30天，必要時(shí)可以延長(zhǎng)。

2.5觀察指標(biāo)
各項(xiàng)指標(biāo)于試驗(yàn)開(kāi)始及結(jié)束時(shí)各檢測(cè)一次。
2.5.1安全性指標(biāo)
2.5.1.1一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、心率等（兒童只要求進(jìn)行心肺聽(tīng)診、肝脾觸診等一般體格檢查）
2.5.1.2血、尿常規(guī)檢查
2.5.1.3肝、腎功能檢查（成人受試者測(cè)定此項(xiàng)）
2.5.1.4胸透、心電圖、腹部B超檢查（成人受試者測(cè)定此項(xiàng)且僅試驗(yàn)前檢查一次）
2.5.2功效指標(biāo)：使用臨床記憶量表。用測(cè)試后的各分測(cè)驗(yàn)原始分查量表分，各分測(cè)驗(yàn)量表分相加得總量表分，用總表分查記憶商。
2.5.2.1指向記憶量表分
2.5.2.2聯(lián)想學(xué)習(xí)量表分
2.5.2.3圖象自由回憶量表分
2.5.2.4無(wú)意義圖形再認(rèn)量表分
2.5.2.5人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶量表分
2.5.2.6記憶商

2.6試驗(yàn)材料
2.6.1錄有指向記憶和聯(lián)想學(xué)習(xí)的指導(dǎo)語(yǔ)和刺激詞的磁帶。
2.6.2圖片材料（分甲、乙兩套）
2.6.2.1無(wú)意義圖形再認(rèn) 備第一次呈現(xiàn)用目標(biāo)刺激圖片20張，備第二次再認(rèn)時(shí)呈現(xiàn)用目標(biāo)刺激和混入刺激圖片各20張，共40張，合計(jì)60張圖片。
2.6.2.2圖象自由回憶物象圖片兩組各15張，共30張。
2.6.2.3人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶備第一次呈現(xiàn)用的黑白勾畫(huà)人面像6張，備回憶時(shí)呈現(xiàn)的人面像6張，兩者內(nèi)容相同，順序不同，共計(jì)12張，每張人像圖片背面標(biāo)有該人像的姓氏、職業(yè)、愛(ài)好、特點(diǎn)。
2.6.3錄音機(jī)、秒表、記錄紙。

2.7測(cè)試內(nèi)容及方法：統(tǒng)一使用臨床記憶量表，具體方法參見(jiàn)臨床記憶量表。
臨床記憶量表有五項(xiàng)測(cè)試內(nèi)容：
指向記憶
聯(lián)想學(xué)習(xí)
圖象自由回憶
無(wú)意義圖形再認(rèn)
人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶
臨床記憶量表的特點(diǎn)是備有有文化和無(wú)文化兩個(gè)部分的正常值，便于檢測(cè)無(wú)文化者。臨床記憶量表共包括5個(gè)分量表。各分測(cè)驗(yàn)的測(cè)試順序（如圖象自由回憶的圖片呈現(xiàn)順序）在所有受試者中應(yīng)一致。

2.7.1指向記憶：包括兩組內(nèi)容，每組24個(gè)詞，每詞由2-3個(gè)字組成，以1秒的速度讀出，兩個(gè)詞之間間隔2s，其中有12個(gè)詞屬于同一類別，即為指向詞：另12個(gè)混在其中相類似的詞，為非指向詞。（例如甲套第一組詞中有12個(gè)詞屬于水果類，混雜的詞有粽子、年糕、冰糖12個(gè)食品類詞：第二組詞中有12個(gè)詞屬于動(dòng)物類，混雜的詞有皮膚、尾巴、眼睛、耳朵等身體器官類詞12個(gè)。）要求受試者記憶指定的同類別詞（如水果）。24個(gè)詞隨機(jī)排列，用錄音機(jī)放送，每組詞全部放送完畢后，要求受試者者立即回憶，說(shuō)出要求記憶的一類詞（不一定要按放送的順序回憶）。主試者按受試者者回憶的順序，將所說(shuō)出的內(nèi)容在記錄紙上按順序用數(shù)字記在相應(yīng)詞下面的方格內(nèi)，并記錄總的反應(yīng)時(shí)間，如果受試者說(shuō)出的不是放送的詞內(nèi)容（稱為“添加性錯(cuò)誤”），則寫(xiě)在記錄紙上該組詞后面空格內(nèi)。如果說(shuō)的是混雜進(jìn)去的不需記憶的詞，則記在下面非指向欄內(nèi)相應(yīng)詞下，亦算錯(cuò)誤。反應(yīng)時(shí)間從主試者說(shuō)：“現(xiàn)在請(qǐng)您回答”算起，直到回憶結(jié)束。允許回憶時(shí)間不超過(guò)2min。
當(dāng)?shù)谝唤M詞受試者回憶結(jié)束后，間隔5s，再重復(fù)一遍指導(dǎo)語(yǔ)，然后放送第二組詞，方法同前。在第二組詞回憶完畢后，詢問(wèn)受試者“除了要求您記的動(dòng)物（或穿戴）這類詞以外，您還記得別的詞嗎？”這就是“非指向記憶”結(jié)果，可記錄在表內(nèi)混雜詞下面的方格內(nèi)。這里要注意在第一組詞回憶完畢時(shí)，不要做這樣的詢問(wèn)，否則將引起受試者在識(shí)記第二組詞時(shí)把注意力指向識(shí)記包括指向和非指向在內(nèi)的所有詞，那就不符合這項(xiàng)測(cè)驗(yàn)的原意了。最后詢問(wèn)受試者“用什么方法記憶”。
指導(dǎo)語(yǔ)：“我念一些詞，您要注意聽(tīng)，里面有的是水果名字（或動(dòng)物名字、蔬菜名字、穿戴的東西），有的不是，要求您記住水果名字（或動(dòng)物名字—天上飛的、地下跑的、爬的，大的、小的都算；蔬菜名字、穿戴的東西）。我念完以后，您要把聽(tīng)過(guò)的水果（或動(dòng)物、蔬菜、穿戴）的名字說(shuō)出來(lái)，不一定按照我念的順序說(shuō)，記得什么就先說(shuō)什么，聽(tīng)明白了嗎？現(xiàn)在注意聽(tīng)”。如果指導(dǎo)語(yǔ)沒(méi)聽(tīng)明白，可以重復(fù)口述一遍�？陬^重復(fù)時(shí)，指導(dǎo)語(yǔ)不得任意更改，例如，“要求記住水果（或其它）名字”不得改成“只要記住水果名字或光記（或就記）水果名字”，或者甚至加上“不記其它的東西”就更不對(duì)了，這會(huì)導(dǎo)致沒(méi)的結(jié)果，是不允許的。計(jì)分：以兩組指向記憶刺激詞的正確回憶數(shù)之和來(lái)計(jì)分，并記錄添加性錯(cuò)誤的詞或其它錯(cuò)誤備分析研究用。（滿分24分）。
甲套指向記憶詞呈現(xiàn)順序?yàn)椋?span id="5u59trqh" class=Apple-converted-space>
1．橘子香蕉粽子石榴桃子粉條年糕西瓜葡萄冰糖鴨蛋柿子茶葉豆腐蘋(píng)果白酒牛奶李子餅干杏花椒香瓜木耳鴨梨
2．烏鴉公雞耳朵蜜蜂兔子指甲皮膚狐貍麻雀眼睛肩膀青蛙牙齒肝臟蒼蠅翅膀心臟老虎頭發(fā) 猴子尾巴蜻蜓鼻子螞蟻
乙套指向記憶詞呈現(xiàn)順序?yàn)椋?span id="5u59trqh" class=Apple-converted-space>
1．蘿卜茄子大麥韭菜黃瓜玉米松樹(shù) 扁豆冬瓜梅花稻子辣椒荷花楊樹(shù) 白菜桃花棉花菠菜芝麻西紅柿菊花芹菜柳樹(shù) 豆芽菜
2．圍巾球鞋牙膏裙子手套筷子板凳短褲雨衣鐵鍋剪刀大衣鬧鐘電燈襪子火柴縫紉機(jī) 皮襖刷子襯衫扁擔(dān) 毛褲掃帚草帽

2.7.2聯(lián)想學(xué)習(xí)：每套有12對(duì)2個(gè)字組成的詞構(gòu)成量表，其中容易的（成對(duì)聯(lián)想詞間有邏輯聯(lián)系）與困難的（成對(duì)聯(lián)想詞間無(wú)邏輯聯(lián)系）成對(duì)詞各6對(duì)，容易聯(lián)想包括反義詞（如困難—容易）、同類詞（如太陽(yáng)—月亮）和從屬詞（如牲口—牛馬）各兩對(duì)；困難聯(lián)想包括具體—具體（西瓜—衣服）、抽象—具體（如勇敢—電燈）和抽象—抽象（如光明—服從）成對(duì)詞各兩對(duì)。用以檢查對(duì)不同成對(duì)詞的記憶情況。以每對(duì)詞3s的速度讀出，兩對(duì)詞之間間隔2s，12對(duì)詞隨機(jī)排列，用錄音機(jī)放送，共放送三遍，即受試者有三次學(xué)習(xí)機(jī)會(huì)，但每遍詞放送的順序不同。每放送一遍后，主試者念每對(duì)詞的前面一個(gè)詞（即刺激詞），要求受試者答出后面一個(gè)詞來(lái)（即反應(yīng)詞），主試者將結(jié)果記錄在相應(yīng)格內(nèi)。如果回答正確，打“√”號(hào)，如果錯(cuò)誤，則記錄錯(cuò)答之詞，沒(méi)答出來(lái)，則以“0”表示。每對(duì)詞允許回憶時(shí)間5s。最后詢問(wèn)受試者“用什么方法記憶”。
指導(dǎo)語(yǔ)：“我給您念12對(duì)詞，您要注意聽(tīng)，要求您記住哪兩個(gè)詞是連在一起的一對(duì)，比如我念‘桌子—車馬’，表示‘桌子’和‘馬車’是聯(lián)在一起的一對(duì)詞。我念完12對(duì)詞以后，就念每對(duì)詞中的前面一個(gè)詞，要求您答出和它一對(duì)的后面一個(gè)詞來(lái)，比如我念‘桌子’，您就回答（停頓一下，讓受試者回憶）‘馬車’聽(tīng)明白了嗎？”如果沒(méi)聽(tīng)明白，可以重復(fù)口述一遍。
計(jì)分：分為容易、困難以及兩者之和三種分?jǐn)?shù)。每遍放送后，對(duì)容易的詞每答對(duì)一個(gè)計(jì)0.5分，6對(duì)共3分；困難的詞每答對(duì)一個(gè)計(jì)1分，6對(duì)共6分，6對(duì)容易和6對(duì)困難詞之和為9分，三遍的滿分為27分。

2.7.3圖象自由回憶：包括2組畫(huà)有物體的圖片材料，每組15張，所畫(huà)的物體都是人們常見(jiàn)的、熟悉的和易于辨認(rèn)的東西，如日用品、交通工具等。每張圖片呈現(xiàn)4s、圖片間間隔2s，圖片順序隨機(jī)排列。15張圖片呈現(xiàn)完畢后，要求受試者立即回憶說(shuō)出所記得的圖片內(nèi)容（不一定要按刺激呈現(xiàn)的順序回憶）。主試者按受試者回憶的順序，將所記得的圖片在記錄紙上按順序用數(shù)字記在相應(yīng)圖片名稱下的方格內(nèi)，并記錄總的反應(yīng)時(shí)間。如果受試者說(shuō)出的是圖片中沒(méi)有的內(nèi)容（稱為添加性錯(cuò)誤），則寫(xiě)在記錄紙上該圖片系列后面的空格內(nèi)。反應(yīng)時(shí)從主試者“現(xiàn)在請(qǐng)您回答”算起，直到回憶結(jié)束。允許回憶時(shí)間不超過(guò)2min。當(dāng)?shù)谝唤M圖片受試者回憶結(jié)束后，間隔5s，再重復(fù)一遍指導(dǎo)語(yǔ)，然后呈現(xiàn)第二組圖片，方法同前。最后詢問(wèn)受試者“用什么方法記憶”。
口述指導(dǎo)語(yǔ)：“我給您看一些圖片，您仔細(xì)看，并記住它們是什么，有看不表的可以問(wèn)，等全部看完后，立即說(shuō)出您看到的是些什么東西，不一定按照我念的順序說(shuō)，記得什么就先說(shuō)什么，聽(tīng)明白了嗎？現(xiàn)在注意看”如果沒(méi)聽(tīng)明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。
計(jì)分以兩組圖片的正確回憶數(shù)之和計(jì)分（滿分30分），并記錄添加性錯(cuò)誤。

2.7.4無(wú)意義圖形再認(rèn)：包括20張目標(biāo)刺激圖片，40張?jiān)僬J(rèn)刺激圖片（其中與呈現(xiàn)圖片相同目標(biāo)刺激圖片20張，相似混同刺激圖片20張）。目標(biāo)刺激為5種形式的無(wú)意義圖形，即曲線封閉、直線封閉、曲線直線、曲線不封閉、直線不封閉。每種各4張，共20張。
測(cè)驗(yàn)時(shí)，先給受試者分別呈現(xiàn)20張目標(biāo)刺激圖片，每張呈現(xiàn)3s，相隔3s,要求受試者記住這些目標(biāo)刺激。然后，隨機(jī)呈現(xiàn)40張?jiān)僬J(rèn)刺激圖片（包括目標(biāo)刺激圖片和混同刺激圖片），圖片隨機(jī)排列，要求受試者將與目標(biāo)刺激圖片完全相同的圖片辨認(rèn)出來(lái)，即每張圖片呈現(xiàn)時(shí)，回答“看過(guò)”或“沒(méi)看過(guò)”，每張?jiān)试S回憶時(shí)間為5s。如果對(duì)目標(biāo)刺激回答“看過(guò)”，則按圖片中央Z號(hào)（從1--20）在記錄紙目標(biāo)刺激一項(xiàng)相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，如答“沒(méi)看過(guò)”，則打“×”號(hào)。如果對(duì)混入刺激回答“沒(méi)看過(guò)”，則按圖片中央Z號(hào)（從21--40）在記錄紙混入刺激一項(xiàng)相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，如答“沒(méi)看過(guò)”，則打“×”號(hào)。最后詢問(wèn)受試者“用什么方法記憶”。
口述指導(dǎo)語(yǔ)：“我給您看一些由簡(jiǎn)單的曲線和直線構(gòu)成的圖形，看的時(shí)間比較短，您要仔細(xì)看，并記住它們的特點(diǎn)，有看不表的可以問(wèn)，等看完后，我再給您看另一些圖片，其中有您看過(guò)的，也有您沒(méi)有看過(guò)的，它們都很相似，要求您認(rèn)出哪些是看過(guò)的，哪些是沒(méi)看過(guò)的，聽(tīng)明白了嗎？現(xiàn)在注意看”。如果沒(méi)聽(tīng)明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。
無(wú)意義圖形背面的數(shù)字表示
計(jì)分再認(rèn)分=（正確再認(rèn)目標(biāo)刺激—錯(cuò)誤混入刺激數(shù)）×2（滿分40分），即再認(rèn)分=（擊中—虛報(bào)）×2
對(duì)目標(biāo)刺激回答“看過(guò)”，稱為“擊中”，對(duì)沒(méi)看過(guò)的混入刺激也回答“看過(guò)”，稱為“虛報(bào)”。

2.7.5人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶：包括6張黑白人面像圖片。按隨機(jī)順序排列每張人像分別呈現(xiàn)9s，間隔3s，在呈現(xiàn)的同時(shí)，告訴被測(cè)驗(yàn)者每張圖片上的人像的姓名、職業(yè)和愛(ài)好等特點(diǎn)，重復(fù)2遍，并要求被測(cè)驗(yàn)者記住人像及特點(diǎn)之間的聯(lián)系。然后再以另一順序呈現(xiàn)這些圖片，讓被測(cè)驗(yàn)者立即說(shuō)出人像的姓名、職業(yè)和愛(ài)好等特點(diǎn)。如果回答正確，主試者在記錄者即說(shuō)出人像的姓名、職業(yè)和愛(ài)好等特點(diǎn)。如果回答正確，主試者在記錄紙相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，回答錯(cuò)誤，則記下說(shuō)錯(cuò)的內(nèi)容，每張人像允許回憶時(shí)間30s。
口述指導(dǎo)語(yǔ)：“我給您看一些畫(huà)的人像，在給您看每張人像的同時(shí)，向您介紹他姓什么、職業(yè)和愛(ài)好特點(diǎn)，請(qǐng)您一邊注意看人像，一邊注意聽(tīng)介紹，且要把人你和他的三個(gè)特點(diǎn)聯(lián)系起來(lái)記憶�？赐耆咳讼窈�，當(dāng)我再給您看每一張人像時(shí)，要求您立即說(shuō)出他的三個(gè)特點(diǎn)，不一定按我說(shuō)的順序回答，記得什么先說(shuō)什么，聽(tīng)明白了嗎？”，如果沒(méi)聽(tīng)明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。
計(jì)分分別記錄回憶出的姓名、職業(yè)和愛(ài)好的數(shù)目，每個(gè)姓名記2分，每項(xiàng)職業(yè)和愛(ài)好各記1分，然后以三項(xiàng)總和計(jì)分。（滿分24分）
臨床記憶量表的5個(gè)分量表都有各自的記分方法，各分量表得出的分?jǐn)?shù)均為原始分。根據(jù)這些原始分，換算量表分的等價(jià)值表，查出各分量表的量表分，計(jì)算出總量表分：然后按照不同的年齡組的總量表分的等值記憶商數(shù)換算表，即可查得記憶商（MQ）。這就作為衡量人的記憶水平的指標(biāo)。

2.8數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定
此試驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，對(duì)兩組各分測(cè)驗(yàn)量表分和記憶商可用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。自身對(duì)照可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間平行比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差劑性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差劑要求，改t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。
結(jié)果判定：在試驗(yàn)前兩組記憶商均衡的前提下，試食后試食組的記憶商高于對(duì)照組，且差異有顯著性，同時(shí)試食組試驗(yàn)后的記憶商高于其試驗(yàn)前的記憶商，且差異有顯著性，可以認(rèn)為受試樣品具有改善記憶作用。

2.9注意事項(xiàng)
2.9.2心理測(cè)驗(yàn)必須由受過(guò)訓(xùn)練的人員進(jìn)行，否則影響試驗(yàn)結(jié)果。
2.9.2測(cè)試應(yīng)當(dāng)在一個(gè)安靜的房間內(nèi)進(jìn)行。除受試者和主試者外，盡量避免有其它人在場(chǎng)。
2.9.3本量表內(nèi)有三項(xiàng)和視覺(jué)有關(guān)的分測(cè)驗(yàn)，室內(nèi)光線必須保證能看得清楚刺激圖片。盡量排除因聽(tīng)力或視力不佳而影響記憶成績(jī)。
2.9.4必須注意受試者受測(cè)時(shí)的精神狀態(tài)，測(cè)驗(yàn)需在受試者情緒正常、不反對(duì)接受測(cè)試、注意力比較集中的情況下進(jìn)行。受試者是否疲倦，注意力是否集中，是否配合、對(duì)測(cè)試是否緊張，是否有信心等均需記錄在記錄紙的首頁(yè)上。
2.9.5同一受試者的測(cè)試要求一次做完。在用年齡量表分比較分測(cè)驗(yàn)成績(jī)時(shí)，必須注意不同分測(cè)驗(yàn)是否在相同的精神狀態(tài)下進(jìn)行的。
2.9.6填寫(xiě)記錄必須認(rèn)真，字跡清楚。填寫(xiě)時(shí)注意以下幾點(diǎn)：
2.9.6.1首頁(yè)必須逐項(xiàng)填寫(xiě)，即受試者的姓名、性別和年齡，以及檢查日期和時(shí)間。
2.9.6.2填寫(xiě)文化程度和職業(yè)作為了解除受試者接受測(cè)驗(yàn)的背景材料。
2.9.6.3填寫(xiě)健康狀況或診斷，前一夜睡眠情況或當(dāng)時(shí)疲倦與否。
2.9.6.4對(duì)表明當(dāng)時(shí)精神狀的各項(xiàng)，如配合程度、注意力、緊張狀態(tài)、信心等也要填寫(xiě)清楚。
2.9.6.5除記錄受試者記憶回答的正誤外，應(yīng)當(dāng)記下錯(cuò)誤回答的具體內(nèi)容，以備分析研究用。
2.9.6.6是否應(yīng)用記憶方法以及使用什么方法對(duì)記憶研究是有益的。在用此量表進(jìn)行研究時(shí)應(yīng)當(dāng)記錄此項(xiàng)。
2.9.6.7各項(xiàng)分測(cè)驗(yàn)成績(jī)的原始分記入首頁(yè)總結(jié)表中，要先經(jīng)復(fù)查，復(fù)查無(wú)誤方可填入原始分項(xiàng)內(nèi)。

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