、對大鼠情感行為及學習記憶的影響的研究已受到國內外學者的關注。臨床研究發(fā)現(xiàn)早年反復熱性驚厥發(fā)作和日后生一定聯(lián)系;實驗證實熱性驚厥可導致未成熟腦海馬區(qū)神經元變性壞死,細胞器及突觸病理性超微結構變化。作者采用熱水浴法建立熱性驚厥大鼠模型,探討熱性驚厥對大鼠情感行為以及學習記憶能力的影響。

1　對象和方法

1 . 1　對象 　21日齡雄性SD(Sp raque2Dawley)大鼠36只(西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供) ,體重為(50±5)g ;隨機數(shù)字法均分為熱性驚厥組(FS) 、發(fā)熱對照組(F G) 、正常對照組(N G) ,每組大鼠數(shù)目均為12只;各組均于標準環(huán)境下飼養(yǎng),自由進食飲水。

1 . 2　方法

1 . 2 . 1　建立熱性驚厥模型 　采用熱水浴法建立熱性驚厥大鼠模型:將FS組大鼠放入一透明玻璃筒中(直徑10 cm ,高50 cm) ,該筒下部有多個小孔和外部相通;將筒豎放于恒溫(45 . 0±0 . 25) ℃水浴箱(100 cm×70 cm×50 cm)中,通過向玻璃筒底墊放橡膠墊片以調節(jié)筒中水的高度,以大鼠沿筒壁站立時僅露出頸部以上為準;每只大鼠上、下午均用該方法誘發(fā)驚厥一次,連續(xù)5 d共10次;觀察驚厥的發(fā)生并記錄驚厥發(fā)生的潛伏期(大鼠入水至驚厥開始的時間間隔,記錄單位為min) 、級別、持續(xù)時間(大鼠驚厥開始至驚厥結束的時間間隔,記錄單位為秒) 。F G組大鼠以同樣的方法在熱水中浸浴2min而未發(fā)生驚厥。N G組不進行任何處理。驚厥級別參照W J iang等的標準: 0 級為未發(fā)生抽風;1級為面部抽動;2級為點頭;3級攣抽搐;4級為全身強;5級為全身強直陣攣。

1 . 2 . 2　曠場試驗(open field test ,OFT) 　型號：XR-XZ301（上海欣軟信息科技有限公司研發(fā)）將一60 cm×60 cm×60 cm的無頂木盒底部等分為36個小方格,完成10次驚厥的大鼠放置于木盒底部的中央,記錄5min內大鼠活動經過的格子數(shù)的得分、后肢性站立的次數(shù)以及排出糞便的粒數(shù)。記分標準為:大鼠1/ 2以上身體進入相鄰方格記1分,后肢性站立記1分,合計為其總分。研究認為,經過的格子數(shù)的得分反映動物的興奮性;后肢性站立的次數(shù)代表大鼠對陌生環(huán)境的適應能力; 排出糞便的粒數(shù)提示大鼠的緊張程度。

1 . 2 . 3　避暗試驗(passive avoidance test , PAT) 　SF K2Ⅰ型避暗測試箱(日本產)分明、暗兩室,其間有小門相通;避暗習性使大鼠本能地選擇進入暗室,進入暗室的大鼠即刻遭受電擊(3 mA ,50 Hz)而被動地逃回安全的明室。5 min不進入暗室則被認為完成了學習,記錄遭受10次熱性驚厥后大鼠在完成學習前錯誤地進入暗室的次數(shù),主要反映大鼠近期學習的能力; 24 h后再次放回明室,記錄大鼠由明室進入暗室的時間,即為記憶潛伏期,主要反映大鼠近期記憶的能力。

1 . 2 . 4　Morris水迷宮試驗(Morris water maze test ,MWM T) 　Morris水迷宮型號：XR-XM101（上海欣軟信息科技有限公司研發(fā)）由圓形水池(直徑130 cm ,高50 cm) 、攝像頭以及操作分析系統(tǒng)(微機及軟件)組成。圓形水面被通過圓心的兩條假想垂線劃分為4個象限。試驗前一天使大鼠在水池內自由游泳2 min ,以熟悉環(huán)境。試驗時間共4 . 5 d ,在其中一個象限的正中水域內放置一個圓形透明站臺(直徑10 cm ,高28cm) ,站臺隱于水面下2 cm處,水溫保持于24℃左右。每天上、下午各進行4次試驗,每只大鼠隨機從每個象限的中點面壁式入水1次,大鼠入水后盡力逃避水患,當發(fā)現(xiàn)站臺后則棲身其上,圖像采集系統(tǒng)及分析系統(tǒng)自動記錄大鼠找到站臺的潛伏期(escape latency) 。如果120秒仍未找到站臺,由操作者將大鼠引上站臺休息4秒,并將潛伏期記為120秒。每只大鼠上、下午4次成績的均值作為一個時段值(sectio n , Ⅰ2Ⅸ)進行分析。曠場實驗、Morris水迷宮對大鼠情感行為及學習記憶的影響

1 . 3　統(tǒng)計學處理 　所有計量資料均以…x ±s 表示。依資料性質進行方差分析,檢驗水準為α= 0 . 05。

2　結 　果

2 . 1　熱性驚厥發(fā)生情況 　FS組全部誘發(fā)出熱性驚厥,共誘發(fā)驚厥120次,無1例死亡。5、4、3、2、1級驚厥次數(shù)(及百分比)分別為89(74 . 0 %) 、5(4 . 6 %) 、20(16 . 5 %) 、4(3 . 5 %) 、2(1 . 4 %)次;驚厥發(fā)生的潛伏期為(4 . 02±0 . 76)min ;驚厥持續(xù)時間為(1 . 01±0 . 53)min。

2 . 2　曠場試驗中情感行為的改變 　FS組大鼠穿格得分分值(37 . 48±7 . 09)最低,后肢性站立的次數(shù)(12 . 11±4 . 41)最少, 5 min 內排出的糞便粒數(shù)(10 . 62±2 .32)最多; FS組與N G、F G組相比在穿格得分(q= 4 .72 ,4 . 18 ;P< 0 . 01) 、后肢性站立的次數(shù)(q= 5 . 12 ,4 .85 ;P< 0 . 01)以及排出糞便粒數(shù)(q= 5 . 33 ,5 . 02 ;P<0 . 01)等方面的差異有非常顯著性。此外,在排出糞便粒數(shù)方面,N G、F G組差異亦有非常顯著性(q= 3 . 17 ,P< 0 . 05) 。

2 . 3　避暗試驗中學習記憶的變化 　FS組大鼠在達到學會程度時所犯錯誤次數(shù)(4 . 02±1 . 29)最多,同N G、F G組相比差異有非常顯著性( q= 6 . 2 4 , 5 . 3 1 ;P<0 . 01) 。24 h后FS組大鼠的記憶潛伏期(169 . 71±103 . 22)最短,同N G、F G組相比差異有非常顯著(q= 5 . 69 ,5 . 28 ;P< 0 . 01) 。結果表明反復熱性驚厥發(fā)作可以損害大鼠短期學習記憶能力。

2 . 4　Morris水迷宮試驗中空間學習能力的變化 　FS組大鼠在Morris水迷宮中尋找隱匿站臺的能力,表現(xiàn)為逃逸潛伏期顯著延長,提示反復熱性驚厥發(fā)作可損害大鼠空間學習能力;方差分析表明FS組同N G、F G組在逃逸潛伏期方面差異有非常顯著性( F= 152 . 46 ,P< 0 . 01) 

3　討 　論

熱性驚厥是兒科最常見的急癥之一,因發(fā)作時臨床表現(xiàn)突然、劇烈而對家庭成員及社會造成不良影響。熱性驚厥能否對患兒日后情感行為以及學習記憶造成損害已引起學者的關注。

3 . 1　本熱性驚厥動物模型的科學性 　本實驗采用熱水浴法建立熱性驚厥模型并對實驗器具加以改造,使熱性驚厥組大鼠全部誘發(fā)不同級別的驚厥,既往文獻報道大鼠易溺死的情況得以改善。實驗器具(底部帶空的玻璃圓筒)的改善也使大鼠的糞便不易排到水浴箱中,從而保證了實驗操作過程的整潔衛(wèi)生。同其他模型相比建立熱性驚厥模型是一種理想的實驗方法。

3 . 2　熱性驚厥對情感行為及學習記憶的影響 　本實驗發(fā)現(xiàn)FS組大鼠在曠場試驗中的興奮性下降,適應新環(huán)境的能力降低,同時易于發(fā)生緊張的不良反應;避暗試驗結果表明反復熱性驚厥發(fā)作可以降低大鼠的短時學習記憶能力。Morris水迷宮是由英國心理學家Morris設計的用以反映小型嚙齒動物空間學習記憶能力的理想裝置,可用以疾病或應激對人類學習記憶能力損害的比擬性研究。FS組大鼠在Morris水迷宮中逃逸潛伏期顯著延長,反映大鼠空間學習能力受損。以上結果表明,反復熱性驚厥發(fā)作可導致大鼠的情感行為以及學習記憶能力受損,和以往的研究相似。

3 . 3　熱性驚厥影響情感行為及學習記憶的可能機制反復熱性驚厥發(fā)作導致大鼠情感行為以及學習記憶能力受損的機制不明。既往研究發(fā)現(xiàn)反復熱性驚厥發(fā)作可導致腦海馬區(qū)結構發(fā)生病理變化,包括海馬區(qū)神經元變性壞死、突觸形態(tài)學改變(突觸間隙異常增寬)、海 馬 區(qū) 異 常 苔 蘚 樣 纖 維 發(fā) 芽(mossy fibresp routing),以及由此所導致的突觸聯(lián)系異常、與學習記憶關系密切的NMDA(N2甲基2D天冬氨酸)受體分布表達異常和信號轉導通路異常。而海馬結構是屬于古皮質,是邊緣系統(tǒng)的重要組成部分。海馬與丘腦前核群、板內核群、下丘腦乳頭丘腦束、扣帶等結構組成的環(huán)路是調節(jié)行為、學習記憶以及情緒反應的重要神經解剖學基礎。因而上述有關海馬結構功能改變的發(fā)現(xiàn)可能是解釋反復熱性驚厥發(fā)作導致大鼠情感行為以及學習記憶能力受損的重要內容。但這些過程之間的關系以及每個過程對腦功能受損的影響程度尚待進一步深入研究。