不同離心方法選用指南

瀏覽次數(shù)：1721　發(fā)布日期：2013-7-24　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

方法的選用
所分離的顆粒大小和密度相差較大:常速、高速;若從樣品液中分離2種以上大小和密度不同的顆粒：差速;超速:差速法和密度梯度法，后者又分速率區(qū)帶和等密度。
1、差速
采用不同速度與時(shí)間，使不同沉降速度的顆粒分批分離；
差速法：
原理：采用逐漸增加速度或低速和高速交替進(jìn)行，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的時(shí)間下分批分離的方法，稱為差速法。
當(dāng)以一定力在一定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行時(shí)，在管底部就會(huì)得到最大和最重顆粒的沉淀，分出的上清液在加上轉(zhuǎn)速下再進(jìn)行，又得到第二部分較大、較重顆粒的“沉淀”及含小和輕顆�！吧锨逡骸�，如此，多次處理，即能把液體中的不同顆粒較好分開。這時(shí)所得沉淀是不純的，需經(jīng)再懸浮和再（2—3次），才能得到較純顆粒。
常用于從組織勻漿中分離細(xì)胞和病毒。
2、密度梯度
又稱速率—區(qū)帶,沉降系數(shù)較接近的物質(zhì)分離的方法；
原理：不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。
介質(zhì)梯度應(yīng)預(yù)先形成，介質(zhì)的最大密度要小于所有樣品顆粒的密度。常用的有蔗糖、甘油；
密度梯度液的制備用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度；
操作：前將樣品小心鋪放在密度梯度溶液表面，形成區(qū)帶。后不同大小、不同形狀、有一定沉降系數(shù)差異的顆粒在密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶；
可用來分離核酸、蛋白質(zhì)、核糖體亞基及其它成分。
3、等密度
原理：當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在力場(chǎng)下，在密度梯度介質(zhì)中，顆粒或向下沉降，或向上浮起，一直移動(dòng)到與它們各自的密度恰好相等的位置上形成區(qū)帶，從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離；
區(qū)別:介質(zhì)、密度梯度范圍與密度梯度不同，欲分離的顆粒密度處于介質(zhì)密度范圍內(nèi)。
介質(zhì)有：氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。
操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時(shí)間。
介質(zhì)梯度不需預(yù)先制備，時(shí)把密度均一的介質(zhì)液和樣品混合后裝入管，通過形成梯度，讓顆粒在梯度中進(jìn)行再分配。常用來分離提取核酸、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒。

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