使用超高效合相色譜進(jìn)行脂溶性維生素膠囊分析
Andrew Aubin
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
應(yīng)用效益
■ 各種脂溶性維生素配方的快速分析。
■ Waters® ACQUITY UPC2™系統(tǒng)可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。一種技術(shù)能夠快速分析這些不同配方。
■ 該系統(tǒng)通過讓實驗室在一個系統(tǒng)上，使用一種技術(shù)來分析各種FSV配方，從而簡化脂溶性維生素分析。
■ 每種脂溶性維生素配方都可以得到快速的分析，目標(biāo)成分可很好地從賦形劑材料中解析出來。
■ 維生素A、E和K1同分異構(gòu)體被成功地分析、分離。
■ 各種脂溶性維生素配方的快速分析。
■ Waters® ACQUITY UPC2™系統(tǒng)可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。一種技術(shù)能夠快速分析這些不同配方。
■ 該系統(tǒng)通過讓實驗室在一個系統(tǒng)上，使用一種技術(shù)來分析各種FSV配方，從而簡化脂溶性維生素分析。
■ 每種脂溶性維生素配方都可以得到快速的分析，目標(biāo)成分可很好地從賦形劑材料中解析出來。
■ 維生素A、E和K1同分異構(gòu)體被成功地分析、分離。
沃特世解決方案
ACQUITY UPC2系統(tǒng)
ACQUITY UPC2色譜柱工具包
Empower™ 3軟件
ACQUITY UPC2 PDA檢測器
ACQUITY UPC2系統(tǒng)
ACQUITY UPC2色譜柱工具包
Empower™ 3軟件
ACQUITY UPC2 PDA檢測器
關(guān)鍵詞
UPC2，脂溶性維生素，維生素E，維生素A，維生素D3，維生素K1，維生素K2
UPC2，脂溶性維生素，維生素E，維生素A，維生素D3，維生素K1，維生素K2
簡介
脂溶性維生素(FSV)(通常來自充油膠囊、充粉膠囊或壓縮片粒)的分析是一項具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。最常見的情況是，這些配方的分析都采用正相色譜法，使用傳統(tǒng)的正相溶劑(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采購和處理的成本相當(dāng)高。用于FSV分析的其它分析色譜技術(shù)包括反相液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法和比色技術(shù)。超高效合相色譜(UPC2™)為脂溶性維生素分析提供了一種可行的技術(shù)，它是一種具備成本效益的、可持續(xù)的和綠色環(huán)保的替代技術(shù)，降低了有機(jī)溶劑的用量，分析時間快，保持了色譜數(shù)據(jù)的品質(zhì)。使用
ACQUITY UPC2系統(tǒng)分析了一系列FSV配方。被檢驗的配方有：維生素A、維生素A+D3、維生素E，維生素D3、維生素K1和維生素K2，如表1所示。這些實驗的結(jié)果表明，UPC2有可能替代當(dāng)今正在使用的許多分離方法成為唯一的一種技術(shù)。
脂溶性維生素(FSV)(通常來自充油膠囊、充粉膠囊或壓縮片粒)的分析是一項具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。最常見的情況是，這些配方的分析都采用正相色譜法，使用傳統(tǒng)的正相溶劑(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采購和處理的成本相當(dāng)高。用于FSV分析的其它分析色譜技術(shù)包括反相液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法和比色技術(shù)。超高效合相色譜(UPC2™)為脂溶性維生素分析提供了一種可行的技術(shù)，它是一種具備成本效益的、可持續(xù)的和綠色環(huán)保的替代技術(shù)，降低了有機(jī)溶劑的用量，分析時間快，保持了色譜數(shù)據(jù)的品質(zhì)。使用
ACQUITY UPC2系統(tǒng)分析了一系列FSV配方。被檢驗的配方有：維生素A、維生素A+D3、維生素E，維生素D3、維生素K1和維生素K2，如表1所示。這些實驗的結(jié)果表明，UPC2有可能替代當(dāng)今正在使用的許多分離方法成為唯一的一種技術(shù)。
實驗
系統(tǒng)： ACQUITY UPC2包括：二元溶劑管理器、樣品管理器
合相管理器、色譜柱管理器、PDA檢測器
色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
數(shù)據(jù)系統(tǒng)： Empower 3軟件
分離方法： 每種分離方法的詳細(xì)介紹包含在本應(yīng)用文集的單個結(jié)果和討論部分中。
系統(tǒng)： ACQUITY UPC2包括：二元溶劑管理器、樣品管理器
合相管理器、色譜柱管理器、PDA檢測器
色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
數(shù)據(jù)系統(tǒng)： Empower 3軟件
分離方法： 每種分離方法的詳細(xì)介紹包含在本應(yīng)用文集的單個結(jié)果和討論部分中。
樣本制備
充油膠囊(維生素A、A + D3、D3)——去除四種膠囊的外殼并分別溶解于10毫升的異辛烷中，無需進(jìn)一步前處理。去除單個維生素E膠囊的外殼并溶解于10毫升的異辛烷中，無需進(jìn)一步預(yù)處理。
充油膠囊(維生素A、A + D3、D3)——去除四種膠囊的外殼并分別溶解于10毫升的異辛烷中，無需進(jìn)一步前處理。去除單個維生素E膠囊的外殼并溶解于10毫升的異辛烷中，無需進(jìn)一步預(yù)處理。
用異辛烷對八片碾碎的維生素K1片進(jìn)行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。
去除八粒充粉維生素K2的外殼，并用異辛烷進(jìn)行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。
結(jié)果與討論
維生素 A
該維生素A的配方為源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。如圖1所示，維生素A棕櫚酸酯的兩種主要形式(順式和反式異構(gòu)體，分別為1.325分鐘和1.394分鐘)和賦形劑的小峰得以完全分離，并標(biāo)示于圖中，洗脫范圍為2.0分鐘至2.5分鐘。該分離采用梯度模式，二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)在3min內(nèi)從97:3變化到90:10，主動背壓調(diào)節(jié)器(ABPR)壓力為2176 psi，詳細(xì)的參數(shù)如表2所示。使用該分離方法，維生素A乙酸酯、棕櫚酸酯和視黃醇被輕易分離，如圖2所示。
維生素 A
該維生素A的配方為源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。如圖1所示，維生素A棕櫚酸酯的兩種主要形式(順式和反式異構(gòu)體，分別為1.325分鐘和1.394分鐘)和賦形劑的小峰得以完全分離，并標(biāo)示于圖中，洗脫范圍為2.0分鐘至2.5分鐘。該分離采用梯度模式，二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)在3min內(nèi)從97:3變化到90:10，主動背壓調(diào)節(jié)器(ABPR)壓力為2176 psi，詳細(xì)的參數(shù)如表2所示。使用該分離方法，維生素A乙酸酯、棕櫚酸酯和視黃醇被輕易分離，如圖2所示。
維生素A + D3
與前例相似，維生素A+D的配方為：源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。同樣，兩種形式的維生素A棕櫚酸酯(順式和反式異構(gòu)體，分別為2.626分鐘和2.851分鐘)在賦形劑峰之前出峰。為了將維生素D3(VD3，6.862分鐘)從主要賦形劑和配方中所含的其它化合物中完全分離出來(如圖3所示)，需要使用更長的色譜柱來提供足夠的分離效率，才能完成該目標(biāo)。系統(tǒng)具有足夠的靈敏度，可輕松地檢測到維生素D3的峰，如圖3所示。
與前例相似，維生素A+D的配方為：源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。同樣，兩種形式的維生素A棕櫚酸酯(順式和反式異構(gòu)體，分別為2.626分鐘和2.851分鐘)在賦形劑峰之前出峰。為了將維生素D3(VD3，6.862分鐘)從主要賦形劑和配方中所含的其它化合物中完全分離出來(如圖3所示)，需要使用更長的色譜柱來提供足夠的分離效率，才能完成該目標(biāo)。系統(tǒng)具有足夠的靈敏度，可輕松地檢測到維生素D3的峰，如圖3所示。
該分離采用二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)進(jìn)行梯度洗脫，按99:1到90:10的比例在10分鐘內(nèi)完成，詳細(xì)信息如表3所示
維生素D3
使用與維生素A+D3相同的分離條件(如表3所示)，維生素D3(膽鈣化醇，6.867分鐘)被輕松地從膠囊賦形劑材料(標(biāo)記為主要成分為葵花籽油)中分離出來，如圖4和表3所示。
使用與維生素A+D3相同的分離條件(如表3所示)，維生素D3(膽鈣化醇，6.867分鐘)被輕松地從膠囊賦形劑材料(標(biāo)記為主要成分為葵花籽油)中分離出來，如圖4和表3所示。
維生素 E
針對維生素E膠囊開發(fā)出一種非�？焖俚奶荻确治龇�(運(yùn)行時間約90秒)，可輕松地將4種生育酚異構(gòu)體(α、β 、γ、δ-VE)基線分離。該分離方法采用梯度洗脫，二氧化碳和甲醇按98:2至95:5的比例在1.5分鐘完成，詳細(xì)信息如表4所示。
針對維生素E膠囊開發(fā)出一種非�？焖俚奶荻确治龇�(運(yùn)行時間約90秒)，可輕松地將4種生育酚異構(gòu)體(α、β 、γ、δ-VE)基線分離。該分離方法采用梯度洗脫，二氧化碳和甲醇按98:2至95:5的比例在1.5分鐘完成，詳細(xì)信息如表4所示。
維生素 K1
采用簡單的等度方法，包含99%二氧化碳和1%的甲醇⁄乙腈(1:1)，維生素K1片中的兩個峰得到完全的基線分離(Rs > 2.0)，如圖6所示。兩個峰的紫外光譜(紫外光位于246 nm通道時同時收集)是相似的，如圖7所示，表明這兩個峰是相關(guān)的。盡管沒有得到確認(rèn)(分析的時候沒有每種異構(gòu)體的單一標(biāo)準(zhǔn)品)，這兩個峰很可能是葉綠醌(維生素K1)的立體異構(gòu)體，詳細(xì)信息如表5所示。
采用簡單的等度方法，包含99%二氧化碳和1%的甲醇⁄乙腈(1:1)，維生素K1片中的兩個峰得到完全的基線分離(Rs > 2.0)，如圖6所示。兩個峰的紫外光譜(紫外光位于246 nm通道時同時收集)是相似的，如圖7所示，表明這兩個峰是相關(guān)的。盡管沒有得到確認(rèn)(分析的時候沒有每種異構(gòu)體的單一標(biāo)準(zhǔn)品)，這兩個峰很可能是葉綠醌(維生素K1)的立體異構(gòu)體，詳細(xì)信息如表5所示。
維生素 K2
維生素K2由甲基萘醌(menaquinone，MK)組成，形式從MK-3到MK-14。不同形式的維生素K2的側(cè)鏈長度由可變數(shù)量的非飽和異戊二烯單元構(gòu)成。該片劑配方顯示了一個主峰和多個較小的峰(如圖8所示)，采用95:5二氧化碳:甲醇的等度分離法，被鑒定為MK-7(數(shù)據(jù)無顯示)。這一結(jié)果與膠囊標(biāo)簽上的說明是一致的，即：該配方應(yīng)該主要含有MK-7。詳情的分離方法如表6所示。
維生素K2由甲基萘醌(menaquinone，MK)組成，形式從MK-3到MK-14。不同形式的維生素K2的側(cè)鏈長度由可變數(shù)量的非飽和異戊二烯單元構(gòu)成。該片劑配方顯示了一個主峰和多個較小的峰(如圖8所示)，采用95:5二氧化碳:甲醇的等度分離法，被鑒定為MK-7(數(shù)據(jù)無顯示)。這一結(jié)果與膠囊標(biāo)簽上的說明是一致的，即：該配方應(yīng)該主要含有MK-7。詳情的分離方法如表6所示。
結(jié)論
■ 沃特世的ACQUITY UPC2系統(tǒng)可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。
■ 每種FSV配方都可以得到快速的分析，目標(biāo)成分可很好地從賦形劑材料中分離出來。
■ 維生素A、E和K1的同分異構(gòu)體被成功地彼此分離。
■ 該系統(tǒng)通過讓實驗室在一個系統(tǒng)上使用一種技術(shù)來分析各種FSV配方，從而極大地簡化了FSV分析。
■ 沃特世的ACQUITY UPC2系統(tǒng)可成功地分析六種不同配方的脂溶性維生素。
■ 每種FSV配方都可以得到快速的分析，目標(biāo)成分可很好地從賦形劑材料中分離出來。
■ 維生素A、E和K1的同分異構(gòu)體被成功地彼此分離。
■ 該系統(tǒng)通過讓實驗室在一個系統(tǒng)上使用一種技術(shù)來分析各種FSV配方，從而極大地簡化了FSV分析。
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