牛呼吸綜合癥病毒抗體elisa試劑盒使用說(shuō)明書

 

隨著熒光定量PCR技術(shù)的成熟和熒光定量PCR儀的普及，用傳統(tǒng)的半定量方法檢測(cè)目的基因表達(dá)量的升高或者降低，已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足當(dāng)前科研的需要，針對(duì)當(dāng)前研究的熱點(diǎn)基因，閃晶生物及時(shí)地從美國(guó)biosuper公司引進(jìn)不同物種、不同基因的熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒。該試劑盒包含了目的基因和內(nèi)參基因的引物、taqman探針(熒光探針)、反轉(zhuǎn)錄試劑、熒光定量PCR試劑、操作說(shuō)明書等，用戶只需將提好的RNA加入就可以進(jìn)行熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，操作方便簡(jiǎn)單、適合多種熒光定量PCR儀，同時(shí)也避免了自己設(shè)計(jì)、合成引物探針的煩惱。目前主要是人、大鼠、小鼠的大部分基因，其它物種的基因需來(lái)電或來(lái)信咨詢。

牛elisa試劑盒使用目的：
　　本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中呼吸綜合癥病毒抗體含量。

牛elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛呼吸綜合癥病毒抗體水平。用純化的牛呼吸綜合癥病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入呼吸綜合癥病毒抗體，再與HRP標(biāo)記的呼吸綜合癥病毒抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呼吸綜合癥病毒抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛呼吸綜合癥病毒抗體濃度。

牛elisa試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（32pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
16pg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
8pg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4pg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2pg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1pg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。