GB/T 8381.11-2005飼料中鹽酸氨丙琳的測(cè)定高效液相色譜法

 

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以高效液相色譜法測(cè)定飼料中鹽酸氨丙琳的方法，適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料和精料補(bǔ)充料中鹽酸氨丙琳的測(cè)定，最低檢測(cè)濃度為1.0 m g/kg.

 

飼料樣品中的鹽酸氨丙琳以含有離子對(duì)試劑的甲醇溶液超聲提取，離心后過(guò)濾，用離子對(duì)反相液相色譜法測(cè)定。

 

除特殊注明外，本法所用的試劑均為分析純，水為蒸餾水，色譜用水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。

1.1 乙睛:色譜純。

1.2 甲醇。

1.3 十二烷基磺酸鈉。

1.4 二乙胺。

1.5 冰乙酸。

1.6 提取液:稱取1. 36 g十二烷基磺酸鈉(1.3),溶于適量2+1(V1+V2)的甲醇水溶液中，并用該混合液稀釋至1 L.

1.7 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品:純度99.8%.

1.8 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液

1.8. 1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品1. 7)0.0500g，置于100mL容量瓶中，用提取液(1. 6)溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為500ug/mL,貯于4--6℃冰箱中，有效期一個(gè)月。

1.8.2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.8.1)10.00 mL，置于50 mL容量瓶中，用提取液(1.6)溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為100 ug/mL。再以此稀釋液配置50 ug/mL,10 ug/mL,5 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.9 HPLC流動(dòng)相:稱取1.09g 十二烷基磺酸鈉(1.3 )，溶于適量體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液中，加入3 mL二乙胺(1.4)和10 mL冰乙酸(1.5)，用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液稀釋至I L混勻，用0.45mm濾膜過(guò)濾，使用前超聲脫氣。

 

分析天平:感量為0.0001g 和0.001g ，各一臺(tái)。

超聲水浴。

離心機(jī):4000r/min-5000r/min,

GE-200液相色譜儀:具有GE-200紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。

 

按GB/T 14699.1采取有代表性的樣品200g -500g ，用四分法縮至100g ，粉碎，使全部通過(guò)0.45mm孔徑的篩，充分混勻，貯于磨口瓶中備用。

 

4.1 提取

稱取飼料樣品5g(準(zhǔn)確至0.0 01g )，置于50m L離心管中，準(zhǔn)確加人提取液(4.6)50.00m L，加塞，充分搖動(dòng)1min，再置超聲水浴中超聲提取20min，其間用手充分搖動(dòng)兩次。取出后于離心機(jī)上4000r/min離心10min，將上清液用0.45um濾膜過(guò)濾，濾液作為試樣溶液。

4.2 測(cè)定

4.2 .1 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定

色譜柱:C18柱，柱長(zhǎng)150mm，柱內(nèi)徑4.6mm,粒度5um，Vertex C18分析柱。

柱溫 : 室溫。

檢測(cè)器 :紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)267nm,

流動(dòng)相流速:1.5m L/min

進(jìn)樣量 : 10ul-20ul。

4.2.2 定f測(cè)定

取 適 量 由7.1獲得的試樣溶液和相應(yīng)濃度的鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.8.2)進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰峰

面積做單點(diǎn)校準(zhǔn)定量。

 

分析結(jié)果表示為鹽酸氨丙琳在飼料中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X，以毫克每千克(mg/kg)表示，用式(1)計(jì)算:X=P2*V1*c*V2/P1*m*V3……………………(1)

式中:

V1— 加人提取液的體積，單位為毫升(mL) ;

V2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣體積，單位為微升(uL);

V3— 試樣溶液的進(jìn)樣體積，單位為微升(uL) ;

P1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;

P2— 試樣溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;

c— 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升(ug/mL);

m— 試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。

 

在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作人員使用同一臺(tái)儀器完成的兩個(gè)平行測(cè)定的相對(duì)偏差不大于7%

 

本標(biāo)準(zhǔn)是在查閱了大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)我國(guó)的技術(shù)發(fā)展水平研究制定的。

本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:國(guó)家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(北京)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:林東下、趙根龍、高生、李蘭、魏秀蓮、范理、蘇曉鷗、靳松。