1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以高效液相色譜（HPLC)測(cè)定飼料中金霉素的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中金霉素的測(cè)定，檢測(cè)限為1n g，最低檢出濃度為4 mg/kg.

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所

有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB /T 6 682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB /T 14699.1 飼料采樣

3 方法原理

使用鹽酸-丙酮溶液提取飼料中的金霉素，調(diào)至pHl.0 -1.2 ，振蕩，過(guò)濾，注人反相柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量分析。

4 試荊和材料

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，除特別注明外，均為分析純。水為蒸餾水，色譜用水為去離子水，符合GB/T 6682用水的規(guī)定。

4.1 氫氧化鈉溶液：400 g/L.

4.2 乙二酸（草酸）溶液：[c(1/2HZC20,)=0.01 mol/L].

4.3 鹽酸溶液：[c(HCI)=4 mol/L].

4.4 提取液：丙酮十鹽酸溶液（4.3)＋水＝13十1十6.

4.5 流動(dòng)相：乙二酸溶液（4.2)＋乙睛（色譜純）＋甲醇（色譜純）=10十3十2.

4.6 金霉素標(biāo)準(zhǔn)液：

4.6.1 金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取金霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.012 90g（含量大于96.9%，儲(chǔ)存于硅膠干燥器中），精確至0.1 m g，置于50m L容量瓶中，用提取液（4.4)溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為250g /L,

貯于4℃～ 6℃ 冰箱中，有效期為一周。

4.6.2 金霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取4 mI一金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（(4.6.1)于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，其濃度為100 g/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5 儀器、設(shè)備

5.1 離心機(jī)：3 000 r/mine

5.2 pH計(jì)：精度0.0 1m V.

5.3 恒溫振蕩器：300 r/min.

5.4 微孔濾膜（孔徑0. 45 pm).

5.5 分析天平：感量0. 1 mgo

5.6 分析天平：感量0.0 1m g.

GB/T 19684-2005

6 試樣的選取和制備

按 G B/ T 14699.1 選取有代表性樣品200g -500g ，用四分法縮至100g ，粉碎通過(guò)0.45m m孔徑篩，充分混勻，貯于磨口瓶中備用。

7 分析步驟

7.1 稱取試樣lg-10g（金霉素含量大于等于40m g/kg)，準(zhǔn)確至0.1 m g，置于具塞錐形瓶中，加人

100 mL提取液（4.4)，手搖2 min，再用鹽酸溶液（4.3)調(diào)pH至1. 0-1. 2(記錄鹽酸溶液的消耗量，作為稀釋倍數(shù)），蓋緊塞子，置恒溫震蕩器（5. 3)中（振蕩速度110 r/min)振蕩30 mine

7.2 將提取液（7.1）倒人離心管，3000 r/min離心15 min,

7.3 取離心上清液用濾膜（5.4)過(guò)濾，濾液作為試樣溶液。

7.4 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定：

分 析柱 C18：柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒度5um（或類似分析柱）；

柱 溫 ：室 溫；

檢 測(cè) 器 ：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)375nm;

流 動(dòng) 相 速度：1.0 m L/min;

進(jìn)樣 量 ： 10ul-20ul

7.5 定量測(cè)定：采用多點(diǎn)外標(biāo)法，根據(jù)濃度與峰面積的線性回歸方程計(jì)算金霉素的含量（g/L)

8 測(cè)定結(jié)果的計(jì)算

8.1 每千克試樣中所含金霉素的質(zhì)量X(mg）按式（1)計(jì)算：

X＝m1\×n

式 中 ：

X— 每千克試樣中所含金霉素的質(zhì)量，單位為毫克（mg);

M1--HPLC試樣色譜峰對(duì)應(yīng)的金霉素質(zhì)量，單位為微克（ug);

m— 試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

n— 稀釋倍數(shù)。

8.2 測(cè)定結(jié)果用平行樣測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。

9 允許差

兩個(gè)平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于7％0