(德國IBL進(jìn)口原裝，貨號(hào)：RE52001)

德國IBL中國獨(dú)家代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)

 

在西方國家，不孕夫婦的比例占總?cè)巳旱?0-15%（Haas et al，1980）。目前人們還不能精確的知道由免疫學(xué)因素導(dǎo)致不孕的發(fā)病率是多少。由于有很多不同的檢測(cè)方法，人們對(duì)抗精子抗體在不孕中的作用存在著很大爭議。在檢測(cè)抗精子抗體的傳統(tǒng)檢測(cè)方法中，精子凝集檢測(cè)和精子固定檢測(cè)已被廣泛應(yīng)用。這些方法及其它凝集檢測(cè)都很耗費(fèi)時(shí)間，并且結(jié)果與其操作不協(xié)調(diào)。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，用ELISA檢測(cè)抗精子抗體具有很多優(yōu)點(diǎn)。IBL公司的抗精子抗體ELISA試劑盒結(jié)合這些優(yōu)點(diǎn)，并同時(shí)還具有高靈敏度和高特異性的特點(diǎn)。此試劑盒操作簡單，并且可以檢測(cè)很多種血清。

注意：此實(shí)驗(yàn)的附加信息可從IBL網(wǎng)址（http://www.IBL-Hamburg.com）上獲取，或直接向漢堡IBL公司索取。

IBL公司的精子抗體酶免試劑盒提供了人血清和精液中抗精子表面抗原抗體定量檢測(cè)所需要的實(shí)驗(yàn)材料。

此檢測(cè)試劑盒利用的是非競爭性的原理。包被在包被板微孔中的精子表面抗原是從池子中提取到的，它采用的方法是Alexander在1984年所提及到的那種方法。將疑似免疫學(xué)不孕病人的血清（已稀釋好）加入到包被孔中溫育，之后洗板，再加入過氧酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白（IgA，IgG和IgM）并溫育。溫育后洗板，再加入TMB底物液，并酶標(biāo)儀檢測(cè)所顯示的顏色強(qiáng)度。微孔中所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的免疫球蛋白濃度成正比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，結(jié)果單位為units/ml。

1)      試劑僅供體外診斷和專業(yè)人士使用。

2)      試劑盒所中有害物質(zhì)的信息請(qǐng)見材料安全數(shù)據(jù)單。

3)      試劑盒中的所有試劑包括檢測(cè)過的人血清/血漿對(duì)HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會(huì)出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能完全被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

4)      請(qǐng)不要用嘴吹試劑，不要將試劑和樣品接觸皮膚和黏膜。

5)      樣本和試劑盒試劑處理場所，請(qǐng)勿吸煙、飲食和使用化妝品。

6)      處理樣品和試劑時(shí)請(qǐng)戴橡膠手套，微生物污染的試劑和樣品會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7)      按照相應(yīng)的國家生物安全管理?xiàng)l理公認(rèn)的方法處理樣品和試劑。

8)      請(qǐng)勿使用過期試劑

9)      按照說明書中所規(guī)定的體積（加樣體積和預(yù)處理步驟）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。使用校準(zhǔn)的移液器時(shí)才可以得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

10)  按照國家生物安全管理?xiàng)l理，實(shí)驗(yàn)中的化學(xué)物質(zhì)和所使用或準(zhǔn)備的試劑應(yīng)當(dāng)當(dāng)作有害廢物處理。

11)  產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)能夠從IBL公司主頁上載可直接咨詢IBL公司獲取。安全數(shù)據(jù)單符合下列標(biāo)準(zhǔn)：EU-Guideline 91/155 EWG， ANSI-Standard，ISO-Sstandard 11014，OSHA（US）。

 

試劑瓶上標(biāo)出的量都是理論體積，所有的試劑瓶都裝滿了試劑。成分低于250μl的溶液，請(qǐng)注意：所有的溶液都在試劑瓶的底部。

4.1.1包被板，12×8孔，微孔中包被了精子表面抗原。

4.1.2標(biāo)準(zhǔn)品，3支，凍干粉，將每支凍干粉溶解于1ml的洗滌液中。重新配制好的標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品S5）100μl內(nèi)含500mU抗精子抗體。

4.1.3酶聯(lián)物，601倍濃縮，1支，100μl，內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgG、IgA、IgM，使用前用稀釋液按1：601的比例進(jìn)行稀釋。

4.1.4 TMB底物液，1瓶，10ml，即用，內(nèi)含TMB及穩(wěn)定劑。

4.1.5 TMB終止液，1瓶，10ml，即用，內(nèi)含1M的H₂SO₄，注意：避免皮膚接觸。

4.1.6洗滌液，20倍濃縮，1瓶，50ml，用雙蒸水按1：20的比例稀釋，配置好的洗滌液在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放4周。

4.1.7稀釋液，3瓶，凍干，每瓶用20ml洗滌液稀釋，配置好的稀釋液在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放2天，如果凍存于-20℃的環(huán)境下則可存放更長時(shí)間。

4.1.8質(zhì)控血清，3支，凍干，每支用1ml的洗滌液稀釋。質(zhì)控血清應(yīng)在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)臨時(shí)配置，并且僅能使用一次。質(zhì)控血清的可接受范圍請(qǐng)見質(zhì)量質(zhì)控單。

4.1.9封板紙，5片

1）校準(zhǔn)的精密移液器及取樣吸頭：0-20μl，10-100μl，100-1000μl

2）多道移液器，50-200μl

3）洗板機(jī)及洗滌瓶

4）37℃溫育器

5）帶450nm濾光片的酶標(biāo)儀

試劑盒應(yīng)當(dāng)2-8℃的環(huán)境下運(yùn)輸。包被板條一但被拆開，應(yīng)當(dāng)將其重新密封好。拆開了板條儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下時(shí)，其免疫活性可穩(wěn)定6周。

實(shí)驗(yàn)開始前將所需數(shù)目的板條和所有試劑都平衡到室溫。試劑盒可分3次進(jìn)行檢測(cè)，下面所述體積可用來檢測(cè)4條包被板條（32個(gè)檢測(cè)孔）。如果實(shí)驗(yàn)中需使用更多板條，則體積應(yīng)當(dāng)相應(yīng)的進(jìn)行改變。

4.3.1洗滌液，在30ml濃縮的洗滌液中加入600ml雙蒸水。

4.3.2稀釋液，在每支凍干的稀釋液中加入20ml即用型的洗滌液。

4.3.3標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清

a）S5（500mU/100μl），將每支標(biāo)準(zhǔn)品用1ml即用型的洗滌液進(jìn)行稀釋。重新配制好的標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品S5）100μl內(nèi)含500mU抗精子抗體。

b）其它濃度的樣品可用稀釋液進(jìn)行連續(xù)稀釋獲得，具體如下：

S5 500mU/100μl S4 250mU/100μl= 500μl S5 + 500μl稀釋液 S3 125mU/100μl= 500μl S4 + 500μl稀釋液 S3 62.5mU/100μl= 500μl S3 + 500μl稀釋液 S2 31.3mU/100μl= 500μl S2 + 500μl稀釋液 S0 0 mU/100μl= 500μl稀釋液（零標(biāo)準(zhǔn)品）

c）質(zhì)控血清，在每支凍干的質(zhì)控血清中加入1ml即用型的洗滌液。

4.3.4酶聯(lián)物，在15μl濃縮的酶聯(lián)物中加入9ml稀釋液，混合均勻。

4.4準(zhǔn)備好試劑的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

4.4.1配置好的洗滌液在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放4周。冷藏時(shí)溶液會(huì)出現(xiàn)磷酸鹽沉淀物，室溫下又會(huì)溶解。

4.4.2樣品稀釋液，配置好的稀釋液在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放2天，如果凍存于-20℃的環(huán)境下則可存放更長時(shí)間。

4.4.3標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，應(yīng)在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)臨時(shí)配置，并且僅能使用一次。

4.4.4酶聯(lián)物，配置好的酶聯(lián)物可在室溫下穩(wěn)定存放20min。

按照國家官方條理處理試劑盒，具體信息請(qǐng)見產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)單。

如果試劑盒有破壞的請(qǐng)與IBL公司聯(lián)系或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后最遲不超過一個(gè)星期。嚴(yán)重破損的成分不能用于實(shí)驗(yàn)，將其保存好直至找到最終的解決辦法。之后，按照官方條例將其處理掉。

 

血清：按照一般原則進(jìn)行靜脈采血。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。

精液：精液樣品應(yīng)當(dāng)用1000的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，之后用上清做實(shí)驗(yàn)（精液）。

血清、精液：采集的樣品存放于2-8℃的環(huán)境下時(shí)，必須在24小時(shí)內(nèi)將其檢測(cè)掉。如果想將血清存放更長時(shí)間，可以將血清凍存于-20℃的環(huán)境下，避免反復(fù)凍融。

血清、精液：用稀釋液將病人樣品按1：51的比例進(jìn)行稀釋（例如：10μl樣品+500μl稀釋液），混合均勻。

 

一般注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)開始前，應(yīng)當(dāng)將所有的試劑和樣品都平衡到室溫。所有試劑混合時(shí)都應(yīng)避免泡沫產(chǎn)生。為了避免交叉反應(yīng)，每份試劑、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都應(yīng)使用新的取樣吸頭。在實(shí)驗(yàn)開始前，我們建議您將所有的試劑都準(zhǔn)備好，將蓋子移去，將所需數(shù)目的板條置于板架上等。這些準(zhǔn)備工作可保證每一加樣步驟間的時(shí)間間隔相同并且無中斷。將所需數(shù)量的板條固定到板架上準(zhǔn)備加樣。

6.1.1加100μl標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中

6.1.2封板后37℃溫育60分鐘。

6.1.3每孔用300μl洗滌液洗板3次（建議您使用洗板機(jī)），吸水紙上拍干。注意：洗板步驟是否操作正確會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精密度。

6.1.4在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物。

6.1.5封板后37℃溫育60分鐘。

6.1.6每孔用300μl洗滌液洗板3次

6.1.7在每一微孔加TMB底物液100μl。

6.1.8室溫（18℃-24℃）溫育10-15分鐘。

6.1.9每孔加50μl終止液以終止底物反應(yīng)，輕輕振板以使溶液混合均勻。

6.1.10加終止液后30min內(nèi)在450nm讀取OD值。（參考波長：600-650nm）

標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本結(jié)果的計(jì)算：

在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品（已稀釋）總的抗精子抗體濃度（mIU/100μl）。最后將結(jié)果乘以0.5便得到未稀釋樣品的濃度（U/ml）。

                           1000（mU變成U的轉(zhuǎn)換系數(shù)）

 

 

用三次回歸、四參數(shù)或雙對(duì)數(shù)方程做標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一般都可以獲得較好的效果。至于結(jié)果的準(zhǔn)確度請(qǐng)件第7項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)特性）。樣品中抗體濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)當(dāng)用相應(yīng)的稀釋液稀釋并重新檢測(cè)。最后將結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋因子即可。

下面是抗精子抗體ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的一個(gè)典型范例：

 

 

IBL公司的實(shí)驗(yàn)室以證明：抗精子抗體ELISA試劑盒可用全自動(dòng)酶免分析儀來做。操作說明可直接向IBL索取或從IBL公司的主頁上下載。具體信息請(qǐng)將“自動(dòng)檢測(cè)”項(xiàng)。

 

建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都確定自己實(shí)驗(yàn)室的正常值范圍。在正常范圍的研究中，所有參與研究的人群都是明顯健康的個(gè)體，正常值的范圍的個(gè)體應(yīng)當(dāng)在95%上。

正常范圍（血清、精液）：＜150mU/100μl，相應(yīng)的在未稀釋樣品中范圍為：＜75U/ml。

包被板的微孔中包被了純化的精子特異性抗原。目前沒有發(fā)現(xiàn)它與其它抗體間有交叉反應(yīng)。

此試劑盒可檢測(cè)到的最低濃度為0.14mU/100μl（等于零標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值減去兩倍的標(biāo)準(zhǔn)差），在未稀釋的樣品中對(duì)應(yīng)為0.07U/ml。

在實(shí)驗(yàn)中，用五中不同的質(zhì)控血清做雙份檢測(cè)來確定板內(nèi)差異。板內(nèi)差異實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

樣品	數(shù)量	平均值（mU/100μl）	標(biāo)準(zhǔn)差（mU/100μl）	CV（%）
1	15	47.0	2.0	4.3
2	15	64.0	7.6	11.9
3	15	98.0	2.6	2.7
4	15	59.0	4.5	7.6
5	15	151.0	11.8	7.8

在實(shí)驗(yàn)中，用五中不同的質(zhì)控血清做雙份檢測(cè)來確定板間差異。板間差異實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

樣品	數(shù)量	平均值（mU/100μl）	標(biāo)準(zhǔn)差（mU/100μl）	CV（%）
1	15	42.0	3.3	7.9
2	15	48.0	7.4	15.4
3	15	77.0	7.7	10.1
4	15	74.0	7.2	9.7
5	15	130.0	17.6	13.6

用稀釋液稀釋血清樣品以得到八份精子抗體濃度不同的血清樣品，再用ELISA試劑盒檢測(cè)已釋樣品中精子抗體的濃度。對(duì)三份樣品都進(jìn)行了稀釋,結(jié)果如下:

樣品	P1(mU/100μl)	重現(xiàn)性（%）	P2(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)	P3(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)
1:1	205.1	100	241.5	100	259.4	100
1:2	100	98	132.8	110	138.6	107
1:4	50.8	99	64.0	106	68.0	105
1:8	32.7	128	32.0	106	35.4	109

 

樣品	P4(mU/100l)	重現(xiàn)性（%）	P5(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)	P6(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)
1:1	272.8	100	242.2	100	366.5	100
1:2	141.4	104	116.0	96	163.3	89
1:4	61.9	91	57.7	95	64.9	71
1:8	31.4	92	33.2	110	33.8	74

 

樣品	P7(mU/100μl)	重現(xiàn)性（%）	P8(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)
1:1	376.9	100	331.0	100
1:2	171.9	91	139.4	84
1:4	83.0	88	82.1	99
1:8	49.0	104	42.9	104

用已知濃度的樣品濃縮四份血清樣品以提高精子抗體的濃度(所有結(jié)果單位都為mU/100μl).

樣品	內(nèi)源性抗體濃度(mU/100μl)	加入樣品的濃度(mU/100μl)	期望值(mU/100μl)	測(cè)的值(mU/100μl)	重現(xiàn)性(%)
1	52.0	346.0	398.0	307.0	77
	52.0	169.0	221.0	175.0	79
	52.0	68.0	120.0	116.0	97
	52.0	35.0	87.0	80.0	92
	52.0	16.0	68.0	69.0	101
2	76.0	346.0	422.0	329.0	78
	76.0	169.0	245.0	236.0	96
	76.0	68.0	144.0	140.0	97
	76.0	35.0	111.0	108.0	97
	76.0	16.0	92.0	91.0	99
3	79.0	326.0	405.0	354.0	87
	79.0	163.0	242.0	198.0	82
	79.0	72.5	151.5	136.0	90
	79.0	34.5	113.5	112.0	99
	79.0	17.5	96.5	89.0	92
4	120.0	319.0	439.0	356.0	81
	120.0	159.5	279.5	231.0	83
	120.0	69.5	189.5	180.0	95
	120.0	34.0	154.0	149.0	97
	120.0	18.0	138.0	130.0	94

 

IBL抗精子抗體ELISA試劑盒與ELIAS抗精子抗體ELISA試劑盒進(jìn)行比較

IBL抗精子抗體ELISA試劑盒與市場上可買到的抗精子抗體ELISA試劑盒同時(shí)檢測(cè)38份病人樣品.線形回歸結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下:

IBL ELISA=4.0698×ELIAS ELISA+1.0441;相關(guān)系數(shù)=0.869;數(shù)量=38

根據(jù)國家規(guī)定，我們建議您用質(zhì)控品。使用質(zhì)控品可以保證結(jié)果的逐日有效性，正常的和病理水平的質(zhì)控都必須使用。質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)控品及相應(yīng)的結(jié)果記述在試劑盒的IBL的質(zhì)控單上。質(zhì)控單上的數(shù)據(jù)及范圍通常都與相應(yīng)的批次對(duì)應(yīng)，而且可直接用于結(jié)果比較。為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議使用國家或國際質(zhì)量評(píng)估程序。采用合適的統(tǒng)計(jì)方法分析質(zhì)控值。如果檢測(cè)結(jié)果不在質(zhì)控材料已確定的可接受范圍內(nèi)，則病人的結(jié)果視為無效。在這種情況下，請(qǐng)檢查下列技術(shù)區(qū)：加樣及記時(shí)設(shè)備；酶標(biāo)儀；試劑有效期；儲(chǔ)存及溫育條件；抽吸及洗板方式。如果檢查了上述設(shè)備并且沒有發(fā)現(xiàn)任何問題，請(qǐng)直接聯(lián)系IBL公司的代理商。

 

樣品處理不當(dāng)或改變實(shí)驗(yàn)程序都可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣品處理不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)所產(chǎn)生的影響請(qǐng)見“樣品采集”。疊氮鈉和硫柳汞濃度高于0.1%都會(huì)影響此實(shí)驗(yàn)。因此，上述成分在質(zhì)控血清或樣品中濃度高于所述濃度時(shí)都可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在抗精子抗體ELISA試劑盒中沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)。

 

實(shí)驗(yàn)必須嚴(yán)格按照生產(chǎn)產(chǎn)家的說明書進(jìn)行操作。另外，實(shí)驗(yàn)者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)則或其它可應(yīng)用的國家標(biāo)準(zhǔn)或法律。這與質(zhì)控試劑的使用有很大的相關(guān)性。為了確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精確性，每個(gè)實(shí)驗(yàn)都必須包含有足夠數(shù)量的質(zhì)控品。如果所有的質(zhì)控品都在特定的范圍內(nèi)，其他所有檢測(cè)參數(shù)也在所給的檢測(cè)范圍呢，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有效。如有任何疑問請(qǐng)聯(lián)系IBL公司。

至于在投訴單（最好使用產(chǎn)家的投訴單）以書面形式上交時(shí)才才能受理，而且投訴單內(nèi)必須包含試劑盒的所有信息及實(shí)驗(yàn)結(jié)果。投訴單的格式可以向IBL索取。

即使所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果都與9.1項(xiàng)所述要求相吻合，治療方法也不能根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出論斷。任何實(shí)驗(yàn)結(jié)果都只是病人臨床癥狀的一部分。只有當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與病人所有的臨床癥狀一致時(shí)，我們才可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定治療方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果本身就從來不能作為確定治療方法的唯一因素。

對(duì)試劑盒做任何修改、交換或混合不同批次的試劑盒成分都會(huì)對(duì)預(yù)期結(jié)果和所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性產(chǎn)生負(fù)面影響。對(duì)試劑盒做了這種修改和交換都不能要求供貨商再包換。如果客戶理解錯(cuò)誤實(shí)驗(yàn)結(jié)果而投訴，則視為無效。不管是任何形式的投宿，生產(chǎn)商所負(fù)的責(zé)任都不會(huì)超過試劑盒本身的價(jià)格。試劑盒在運(yùn)輸過程中所造成的破壞生產(chǎn)商都不負(fù)責(zé)任。

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