ACQUITY UPLC®-Xevo TQ-S 同時(shí)測(cè)定豬尿液中的 21 種 β- 受體激動(dòng)劑
王少珍 沃特世科技（上海）有限公司

今年 3 月，瘦肉精事件引發(fā)全國(guó)拉網(wǎng)式排查，瘦肉精事件鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)， 10 年間瘦肉精屢禁不絕，添加瘦肉精喂出來(lái)的豬不僅顏色光亮，而且可以增加豬的瘦肉率，現(xiàn)在人們都關(guān)注身材，不吃肥膩的肉，這也導(dǎo)致飲食習(xí)慣吃瘦肉，而添加瘦肉精的豬肉正好符合當(dāng)今人們的飲食習(xí)慣，瘦肉精事件一出大家都在徘徊這肉還吃不吃？

簡(jiǎn)介
瘦肉精：一類(lèi)動(dòng)物用藥的統(tǒng)稱(chēng)，任何能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制動(dòng)物脂肪生長(zhǎng)的物質(zhì)都可以叫做 “ 瘦肉精 ” 。 目前，能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類(lèi)叫做 β- 興奮劑的藥物。與傳統(tǒng)瘦肉精鹽酸克倫特羅同屬 “ 腎上腺受體激動(dòng)劑 ” 的萊克多巴胺等同類(lèi)藥物同樣也能提高豬的瘦肉率。鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法（ ELISA ）、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法及液質(zhì)聯(lián)用法。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 5009.192-2003 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定中規(guī)定方法為氣相色譜 - 質(zhì)譜法（ GC-MS ）、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法，其方法檢出限均為 0.5ug/kg 。 SN/T 1924—2007 進(jìn)出口動(dòng)物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測(cè)方法采用 LC/MS/MS 法，該方法具有高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)被普遍使用。本文使用 UPLC/XEVO TQ-S 對(duì)豬尿液中的 β- 受體激動(dòng)劑進(jìn)行分析。

實(shí)驗(yàn)方法
UPLC 條件
LC 系統(tǒng)： ACQUITY UPLC®
運(yùn)行時(shí)間： 10min
色譜柱： ACQUITY® BEH C18 1.7μm ， 2.1mm x 100mm
流動(dòng)相 A ： 0.1% 甲酸水
流動(dòng)相 B ： 乙腈
流速： 0.40mL/min 


MS 條件
MS 系統(tǒng)： Xevo TQ-S
離子模式： ESI+
毛細(xì)管電壓： 3.5kv
源溫度： 150 ℃
霧 化氣溫度： 500 ℃
霧化氣流速： 900L/hr
錐孔氣流速： 20 L/hr

MRM 條件： Quanpedia 數(shù)據(jù)庫(kù)
Quanpedia 是沃特世特有的一種可擴(kuò)展和可搜索的數(shù)據(jù)庫(kù)，為您提供 LC/MS/MS 定量方法信息，目前數(shù)據(jù)庫(kù)已有超過(guò) 1200 種化合物，包括色譜方法、質(zhì)譜方法、定量方法等，您可自由選擇其中的任意化合物或化合物種類(lèi)自動(dòng)形成您所需的方法，無(wú)需再重新進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)過(guò)程。

下圖為數(shù)據(jù)庫(kù)得到的方法信息：

自動(dòng)生成 MRM 方法：

樣品制備
樣品制備參照 GB/T 22286-2008 《動(dòng)源性食品中多種 β- 受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定》進(jìn)行。
■ 量取 2.0mL 豬尿液 樣 品，加入 8mL 0.2M 的 PH 為 5.2 的乙酸鈉緩沖液，充分混勻
■ 加入 50μLβ-Glucuronidase/aryl sulfatase 混勻，于 37 ℃ 水浴水解過(guò)夜
■ 水解液振蕩 15min ，在 5000r/min 條件下離心分離 10min 后，取 4mL 上清液中添加 100uL 10ng/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液混勻，加入 5mL 0.1M 高氯酸混合均勻，并調(diào)節(jié)溶液 PH 值到 1±0.3 。以 5000r/mim 條件下離心分離 10min 后，移取上清液并用 10M 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) PH 值到 11 。
■ 加入 10mL 飽和氯化鈉溶液和 10mL 異丙醇 - 乙酸乙酯（ 6:4 ）混合溶液，離心分離后取有機(jī)相，在 40 ℃ 水浴下用氮?dú)鈱⑵浯蹈?
■ 提取殘?jiān)�中加�?5mL 0.2M 乙酸鈉緩沖液（ PH5.2 ），超聲混勻溶解殘?jiān)?
■ 樣 品 凈 化（如下 圖 所示），使用 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）小柱
■ 凈 化后的洗脫液用氮?dú)獯蹈桑�用�?動(dòng) 相溶解定容至 1.0mL ，過(guò) 0.22μm 濾膜，待進(jìn)樣分析

下圖為數(shù)據(jù)庫(kù)得到的方法信息：
固相提取凈化過(guò)程 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
本方法才用一次進(jìn)樣同時(shí)監(jiān)測(cè)豬尿液樣品中的 21 種 β- 受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測(cè)，在靈敏度、分離度方面獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。與常規(guī)的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀不同的是， Xevo TQ-S 為您提供最好的定量數(shù)據(jù)的同時(shí)，還為您提供高質(zhì)量的光 MS/MS 信息。對(duì)豬尿液中含 0.5ug/L 的受體激動(dòng)劑樣品，啟用 PICs （子離子確認(rèn)掃描）功能，可在不影響 MRM 定量的同時(shí)得到各化合物子離子掃描圖，與標(biāo)樣子離子圖進(jìn)行匹配，對(duì)樣品中陽(yáng)性結(jié)果定性起到幫助判斷的作用。

 

結(jié)論
本方法采用多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ MRM ）方式對(duì) 21 種 β- 受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測(cè)，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、分析周期短、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。適用各類(lèi)動(dòng)物組織或動(dòng)源性食品等的測(cè)定。

IntelliStart 技術(shù)可以使得開(kāi)發(fā)分析方法過(guò)程變成流線(xiàn)型工作流程。這意味著需要更少的時(shí)間來(lái)開(kāi)發(fā)方法，大大提高工作效率。強(qiáng)大的 Quanpedia 數(shù)據(jù)庫(kù)包含上千種化合物的方法，自動(dòng)生成方法文件讓你輕松簡(jiǎn)單快速應(yīng)對(duì)各種突發(fā)事件。

PICs （子離子確認(rèn)掃描）功能為您提供最好的定量數(shù)據(jù)的同時(shí)，還為您提供高質(zhì)量的光譜 MS/MS 信息，對(duì)樣品中陽(yáng)性結(jié)果定性起到幫助判斷的作用。

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50 多年來(lái)，沃特世公司 (NYSE:WAT) 通過(guò)提供實(shí)用和可持續(xù)的創(chuàng)新，使醫(yī)療服務(wù)、環(huán)境管理、食品安全和全球水質(zhì)監(jiān)測(cè)領(lǐng)域有了顯著進(jìn)步，從而為實(shí)驗(yàn)室相關(guān)機(jī)構(gòu)創(chuàng)造了業(yè)務(wù)優(yōu)勢(shì)。

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