人穩(wěn)定型骨鈣素（1-43/49）特異性酶免試劑盒

【預(yù)期用途】

這個ELISA試劑盒是用來對人體骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）（也被稱為N端和中部骨鈣素或穩(wěn)定型骨鈣素）的濃度進行定量檢測。該檢測項目可以用來檢測人的骨形成活性或者成骨細胞活性，他們與代謝性骨疾病中骨更新率的變化相關(guān)，例如骨質(zhì)疏松，原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥，甲狀腺功能亢進，畸形性骨炎以及腎性骨營養(yǎng)不良。

【簡介】

骨鈣素[也叫做骨鈣蛋白質(zhì)（BGP）]是骨骼和牙本質(zhì)中的一種主要的非膠原蛋白質(zhì)。骨鈣素的合成物包括維生素K和維生素D3。新合成的骨鈣素部分釋放到血流中，部分滲入到骨基質(zhì)中。骨鈣素（1-49）及其片段以及骨鈣素（1-43）都會釋放到血流中去。在血液循環(huán)、肝、腎中，骨鈣素（1-49）降解生成穩(wěn)定型血清骨鈣素（1-43）。當抽取人體樣本進行體外降解時，同樣能生成穩(wěn)定型血清骨鈣素（1-43），因為骨鈣素（1-49) C端的六個氨基酸不穩(wěn)定，在體外時，這六個氨基酸極易在室溫下脫落。一些研究證明，臨床上對穩(wěn)定型骨鈣素[骨鈣素(1-43/49)] 進行測定，其效果更好，它能對骨更新率提供更加精確的評估。

骨鈣素由成骨細胞產(chǎn)生，在骨骼形成過程中，它通常作為一個生物化學(xué)指標或者生物指標。在用骨形成藥物 (如Forteo) 治療骨質(zhì)疏松時，通常能觀察到穩(wěn)定型血清骨鈣素水平的增高與骨質(zhì)密度的增加呈現(xiàn)出很強的正相關(guān)。在許多藥物治療研究中，骨鈣素是骨形成的特定療效跟蹤和評定的首選生化指標。

【檢驗原理】

這個ELISA的設(shè)計，研發(fā)和生產(chǎn)的目的是對血清或者血漿樣品中穩(wěn)定型人骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）進行定量檢驗。該試劑盒是基于運用兩種特異性抗體與人骨鈣素的不同抗原表位結(jié)合的“雙位點夾心”技術(shù)。

將標準品、質(zhì)控品、和待測樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，加入生物素偶聯(lián)的人骨鈣素N端特異性多克隆抗體和過氧化物酶標記的人骨鈣素20-43區(qū)域特異性單克隆抗體混合物。經(jīng)過第一個保溫孵育期后，形成了“生物素抗體-人骨鈣素-HRP單克隆抗體”的“雙位點夾心”結(jié)構(gòu)，該免疫復(fù)合體在特異性“鏈霉親和素-生物素”親和結(jié)合的作用下被吸附到微孔板的內(nèi)壁。游離的單抗和緩沖基質(zhì)則被洗滌劑沖走。微孔板加入過氧化物酶基質(zhì)（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，TMB）并經(jīng)過一段時間的反應(yīng)后，測量吸光度。微孔板內(nèi)壁的免疫復(fù)合體的酶活性與樣本中人骨鈣素的濃度成正比。根據(jù)標準品中不同的人骨鈣素濃度的吸光度，按照“點到點”或者“4 - 參數(shù)法”繪制標準曲線，待測樣品中骨鈣素濃度可以直接從標準曲線按測量到的吸光度得到。

簡要實驗步驟

1. 添加25µL標準品、質(zhì)控品和病人樣本到指定孔中；
2. 在各孔中添加200µL抗體混合物；
3. 在室溫下，以350 rpm振動培養(yǎng)60分鐘；
4. 將各孔清洗5次；
5. 添加200 µLELISA HRP基質(zhì)到各個孔中；
6. 將微孔板密封，室溫下靜置20分鐘；
7. 添加50 µLELISA終止液到各個孔中；
8. 讀取450 nm的吸光度。