采用UPLC/Xevo G2 QTof對(duì)1μM維拉帕米進(jìn)行快速而靈敏的體外代謝物鑒定
目的
使用ACQUITY UPLC®／Xevo™ G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)及MetaboLynx™ XS應(yīng)用管理軟件，鑒定通過人肝微粒體體外孵育而獲取的1 μM維拉帕米的代謝物。
背景
近年來，隨著越來越多的一線藥品因存在安全性顧慮而退出市場(chǎng)，人們對(duì)藥品研發(fā)過程中的藥物代謝和毒性研究給予了更多的關(guān)注。如今，在藥物發(fā)現(xiàn)和研制階段提早進(jìn)行藥物代謝研究的趨勢(shì)已比較明顯。普遍的做法是對(duì)母體藥物進(jìn)行體外代謝物研究，以便在藥品開發(fā)早期迅速確定其弱點(diǎn)。
在藥物發(fā)現(xiàn)階段進(jìn)行代謝物鑒定的一項(xiàng)挑戰(zhàn)是：需要提供快速而通用的方法，并且該方法應(yīng)足夠靈敏，以使體外孵育研究可在低μM濃度水平下進(jìn)行，從而使其更接近于化合物的體內(nèi)作用情況。
一項(xiàng)典型的體外代謝研究還包括分析母體藥物的代謝速率和途徑。此類研究的理想分析方案需提供在模擬體內(nèi)條件的底物濃度下對(duì)代謝物進(jìn)行檢測(cè)的分析速度和靈敏度。
利用與UPLC/MSE聯(lián)用的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)，體外代謝物研究可在低μM水平下進(jìn)行，同時(shí)具有較好的速度、靈敏度和選擇性。
圖1. 人肝微粒體維拉帕米（1μM）的孵育結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中。
解決方案
將濃度為1 μM的維拉帕米與人肝微粒體在37°C下進(jìn)行孵育，并分別在 0、15、30、60、120和 240分鐘時(shí)加入等體積的冷乙腈終止反應(yīng)。對(duì)樣品進(jìn)行離心，并取上清液直接進(jìn)樣。
采用沃特世ACQUITY UPLC®系統(tǒng)，ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（1.7 μm、2.1 x 100 mm），進(jìn)行色譜分離。流動(dòng)相由0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）組成，進(jìn)樣量為5.0 μL。在ESI正離子模式下，使用Xevo G2 QTof質(zhì)譜儀采用UPLC/MSE技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，這樣一次進(jìn)樣即可同時(shí)獲取母離子和產(chǎn)物離子的數(shù)據(jù)。
MetaboLynx XS應(yīng)用管理軟件用于進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中（如圖1所示）。產(chǎn)物離子信息同時(shí)進(jìn)行處理，并顯示在MetaboLynx瀏覽器中的碎片分析窗口內(nèi)（圖2）。通過對(duì)多個(gè)孵育時(shí)間點(diǎn)的樣品進(jìn)樣分析，母體藥物的清除曲線和代謝物的形成曲線可在同一次試驗(yàn)中同時(shí)獲�。ㄈ鐖D3所示）。
圖2. 碎片分析窗口中所顯示的MS/MS信息。
圖3. 維拉帕米的清除曲線（3A）及其代謝物的形成曲線（3B）。
通過采用UPLC/MSE 數(shù)據(jù)采集策略，再加上具有化學(xué)智能的MetaboLynx XS數(shù)據(jù)處理工作流程，只需進(jìn)行一次液相色譜進(jìn)樣即可快速完成所有代謝物的鑒定工作。通過在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣，可比較容易地獲取低濃度（μM）孵育水平下目標(biāo)藥物的代謝速率和途徑。因此，產(chǎn)能最大化的目標(biāo)即可輕松實(shí)現(xiàn)。
總結(jié)
這個(gè)應(yīng)用表明：通過使用配備UPLC/MSE 和MetaboLynx XS工作流程的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)，體外代謝物研究可在低濃度（μM）水平下進(jìn)行，同時(shí)具有較好的速度、靈敏度和選擇性。
Xevo G2 QTof系統(tǒng)及其創(chuàng)新型QuanTof™和Engineered Simplicity™技術(shù)，與ACQUITY UPLC系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了完美結(jié)合。它是目前最靈敏的臺(tái)式oaTOF儀器，擁有1 ppm的準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定能力，數(shù)據(jù)采集速度高達(dá)每秒20張光譜圖。
標(biāo)簽：
Xevo™ G2 QTof 1μM維拉帕米
- 反相RediSep®柱在肽分離中的應(yīng)用與優(yōu)化
- 基于離子色譜串聯(lián)串聯(lián)質(zhì)譜的標(biāo)準(zhǔn)方法用于食品安全
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