综合图区亚洲网友自拍|亚洲黄色网络|成人无码网WWW在线观看,日本高清视频色视频kk266,激情综合五月天,欧美一区日韩一区中文字幕页

                                                              English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 原代細胞核基質的制備

                                                              原代細胞核基質的制備

                                                              瀏覽次數:2261 發(fā)布日期:2011-1-27  來源:www.pricells.com.cn
                                                                                            原代細胞核基質的制備                                        

                                                              試劑和器材: 
                                                              1. 硫酸銨(含10mmol/L Tris-HCl,(pH7.4)及0.2mmol/L MgCl2的1mol/L與0.2mol/L硫酸銨溶液);
                                                              2. 氯化鎂(1mol/L儲存液);
                                                              3. 苯甲基磺酰氟(PMSF)(無水乙醇配制的1mol/L儲存液);
                                                              4. 純化的細胞核保存于含0.25mol/L蔗糖、10mmol/L Tris-HCl,(pH7.4)、5mmol/L MgCl2的溶液中;
                                                              5. DNA酶Ⅰ;
                                                              6. Tris-HCl(1mol/L儲存液,pH7.4);
                                                              7. 懸浮緩沖液(SB):5mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.4(含0.1mmol/L苯甲基磺酰氟);
                                                              8. Triton X-100;
                                                              9. 低速離心機,配有固定角轉子和離心管;

                                                              實驗方法:
                                                                 所有的試劑置于0—4℃,并且所有操作均在0—4℃完成。
                                                              1. 向核懸液中加入Triton X-100使其濃度達到1%(體積分數),孵育30min同時用移液器小心混勻,以免產生氣泡;
                                                              2. 1000g離心10min,棄去上清。用懸浮緩沖液小體積重懸提取的核沉淀(如5ml);
                                                              3. 用DNA酶Ⅰ(30U/mg DNA)消化細胞核30min;
                                                              4. 通過緩慢添加1mol/L硫酸銨溶液來增加鹽濃度,使其最終離子強度達到0.6(0.2mol/L 硫酸銨),加入0.2mol/L硫酸銨使體積達到40ml,然后孵育30min;
                                                              5. 1000g離心15min沉淀核基質,棄去上清;
                                                              6. 用懸浮緩沖液重懸沉淀,用相差顯微鏡或薄片電鏡檢測獲得的產物;

                                                              來源:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
                                                              聯(lián)系電話:027-87490190
                                                              E-mail:[email protected]

                                                              標簽: 原代細胞
                                                              用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
                                                              評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
                                                              Copyright(C) 1998-2024 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:[email protected]