急速裂解法去除紅細(xì)胞
器材和試劑:
所有直接接觸細(xì)胞的用品和試劑必須無菌。
1. 標(biāo)注體積刻度的試管(圓錐形底);
2. 巴斯德吸管(短型和長型);
3. 臺式離心機(jī);
4. 培養(yǎng)級純凈水;
5. 2×Hanks平衡鹽溶液;
6. 儲存培養(yǎng)基,含10%血清;
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 1000r/min離心原代細(xì)胞懸液5min,棄上清;
2. 向細(xì)胞沉淀中加入10ml培養(yǎng)級水,并用移液管輕輕來回吹打數(shù)次以重懸細(xì)胞(注:不同細(xì)胞的抗低張能力不同,控制暴露時間低于15s);
3. 迅速加入等體積的2×Hanks平衡鹽溶液恢復(fù)張力,用巴斯德吸管輕輕混勻細(xì)胞懸液;
4. 再次1000r/min離心5min,檢查紅細(xì)胞沉淀。如果紅細(xì)胞仍大量存在,重復(fù)該步驟。否則在儲存培養(yǎng)基中重懸洗滌過的細(xì)胞;
5. 計數(shù)及檢測細(xì)胞活力后,放培養(yǎng)箱培養(yǎng);