臍血MSCs的分離

試劑和材料： 
1. 培養(yǎng)基；
2. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
3. PBSA；
4. T25；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 為了獲得新鮮制備的CB-MNCs，按密度梯度分離法分離單個核細(xì)胞（MNCs）；
2. 用培養(yǎng)基重懸新鮮分離或凍存的MNCs。凍存的MNCs在鋪板前要37℃迅速復(fù)蘇并用培養(yǎng)基洗一遍；
3. 將重懸在培養(yǎng)基的CB-MNCs接種到T25的培養(yǎng)瓶，接種密度為3×10⁵ 個細(xì)胞/cm²；
4. 將細(xì)胞放入37℃ 5%CO_²的培養(yǎng)箱中；
5. 每7天更換一次培養(yǎng)基，直到貼壁生長的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合；
6. 一旦達(dá)到匯合，用0.05%胰蛋白酶/EDTA處理5min，重懸細(xì)胞，然后將細(xì)胞按1×10⁵ 個/瓶重新接種；
7. 達(dá)到細(xì)胞匯合后，用培養(yǎng)基按1：5稀釋后再接種培養(yǎng)；