牙髓組織的分離
試劑和材料:
1. 無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液(PBSA);
2. MSC培養(yǎng)基:含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM,添加15%胎牛血清,0.1mmol/L左旋抗壞血酸磷酸鹽,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;
3. 培養(yǎng)皿;
4. 精細鑷(小號和大號);
5. 牙科碳化鉆頭;
6. 牙挖器;
7. 高速牙科手機;
8. 使用高速牙科手機時的裝備(如空氣壓縮機);
9. 消毒液(如聚維酮碘);
實驗方法:
1. 用PBSA洗三遍,充分清潔牙齒表面;
2. 用消毒液消毒,然后再用PBSA充分清洗;
3. 用連接牙科手機的牙科碳化鉆頭,沿骨質和釉質的結合處切開牙齒,然后暴露髓腔。間歇地將牙齒在用冰預冷的PBSA中浸泡,避免切割過程中過熱。在SHED分離時,有時由于牙根吸收牙髓已經暴露了,就不需要進行這個步驟;
4. 用小號精細鑷或牙挖器,輕輕從牙髓腔中分離牙髓組織;
5. 將牙髓組織放入培養(yǎng)皿中的少量MSC培養(yǎng)液中。注意不要使組織變干;