試劑和材料：
1. 分化培養(yǎng)基：DMEM/F12（1：1）、1%ITS（胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、硒；V/V）、TGF-β1 1ng/ml、HEPES 10mmol/L；
2. 胰蛋白酶/EDTA：胰蛋白酶（0.05%）和EDTA（0.53mmol/L）PBSA配制；
3. PBSA：無(wú)Ca2+,Mg2+的Dulbecco′s磷酸鹽緩沖液；
4. 離心管，15ml；
5. 普通器皿，30ml，或圓錐底的離心管（50ml）；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 從培養(yǎng)瓶中吸出生長(zhǎng)培養(yǎng)基棄之；
2. PBSA潤(rùn)洗后棄之洗液；
3. 加入足量的胰蛋白酶/EDTA覆蓋培養(yǎng)瓶底；
4. 在37℃孵育5—10min（在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落）；
5. 重懸細(xì)胞，置于15ml離心管中，300g離心5min；
6. 用1ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗滌，轉(zhuǎn)移至普通器皿或離心管中；
7. 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)；
8. 重復(fù)離心（620g，10min），棄去上清液；
9. 用分化培養(yǎng)基將其稀釋到1×106個(gè)細(xì)胞/ml；
10. 按1ml/管分裝到新Eppendorf管中；
11. 300g離心5min，上清保留不動(dòng)；
12. 置于37℃孵箱；
13. 每2—3天更換培養(yǎng)基；
14. 培養(yǎng)2—3周軟骨生成；