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                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 利用Hoechst 33342外流性質(zhì)分選原代角膜間質(zhì)干細(xì)胞

                                                              利用Hoechst 33342外流性質(zhì)分選原代角膜間質(zhì)干細(xì)胞

                                                              瀏覽次數(shù):2226 發(fā)布日期:2010-11-10  來源:www.pricells.com.cn
                                                              利用Hoechst 33342外流性質(zhì)分選原代角膜間質(zhì)干細(xì)胞

                                                              試劑和材料:
                                                              1. 2—4代的間質(zhì)細(xì)胞;
                                                              2. HBSS/2FB;
                                                              3. Hoechst 33342染料,1mg/ml水溶;
                                                              4. 碘化丙啶(PI),2mg/ml水溶;
                                                              5. 維拉帕米,500μg/ml水溶;
                                                              6. DEME/2FB;
                                                              7. 胰蛋白酶/TrypLE:TrypLE Express或0.25%胰蛋白酶,溶于CMF-Saline G;
                                                              8. MoFlo(或與其類似的)高速細(xì)胞分選儀,具備350nm激發(fā)能力;

                                                              實(shí)驗(yàn)方法:
                                                              1. 用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒2—4代的間質(zhì)細(xì)胞;
                                                              2. 細(xì)胞計(jì)數(shù),用DMEM/2FB將細(xì)胞稀釋至1×106/cm2個(gè)細(xì)胞/ml;
                                                              3. 加入5μg/ml Hoechst 33342染料,37℃,90min,每20min攪動(dòng)一次;
                                                              4. 對(duì)照組細(xì)胞在加入Hoechst 33342染料前,先加入50μg/ml維拉帕米孵育20min;
                                                              5. 染色后,在4℃環(huán)境下用HBSS/2FB將細(xì)胞洗兩遍并離心,之后在冰上用冷HBSS/2FB重懸細(xì)胞;
                                                              6. 于分選前加入2μg/ml PI以鑒別無活性的細(xì)胞;
                                                              7. 無菌條件下分選細(xì)胞,高速細(xì)胞分選儀,用350nm激發(fā)。收集藍(lán)色(670nm)和紅色(450nm)熒光均減弱的細(xì)胞。邊群細(xì)胞通過上述步驟與死細(xì)胞和完全被染料標(biāo)記的細(xì)胞分離開并被收集起來。對(duì)照組要確保用維拉帕米先行孵育后使邊群細(xì)胞消失;
                                                               

                                                              來源:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
                                                              聯(lián)系電話:027-87490190
                                                              E-mail:[email protected]

                                                              標(biāo)簽: 原代細(xì)胞
                                                              用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
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