FITC標(biāo)記抗體-Chadwick氏法
瀏覽次數(shù):1648 發(fā)布日期:2010-10-13
來源:www.pricells.com.cn
FITC標(biāo)記抗體-Chadwick氏法
試劑:
抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞;
材料:
離心機(jī)及離心管、三角燒瓶(25ml)、冰槽、無菌吸管及毛細(xì)滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯(500ml)等;
方法與步驟:
1. 抗體的準(zhǔn)備。用0—4℃ pH8.0的PBS將免疫球蛋白溶液濃度稀釋為30—40mg/ml,置于三角燒瓶內(nèi),放入冰槽中;
2. 熒光素的準(zhǔn)備。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg熒光素計算,稱取所需的熒光素量,用3%重碳酸鈉水溶液溶解;
3. 將上述已準(zhǔn)備好的抗體與熒光色素溶液等量混合,充分?jǐn)嚢,使其?—4℃冰箱中結(jié)合18—24h;
4. 透析。熒光素與球蛋白結(jié)合完畢后,將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min,除去其中少量的沉淀物后,裝入透析袋中再置于燒杯中,在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析過夜;
5. 過柱。取透析過夜的標(biāo)記物,過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱,分離出游離熒光素,收集標(biāo)記的熒光抗體進(jìn)行鑒定;