此試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫測定法，這個試劑盒可用于一切樣品中三聚氰胺的定性或定量檢測。如果需要進(jìn)一步測定可以利用HPLC, GC/MS技術(shù)。

試劑盒標(biāo)準(zhǔn)中含有少量的三聚氰胺，另外，底物溶液中含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液里含有稀釋的鹽酸。盡量避免不要和這些試劑接觸，如果這些試劑接觸到皮膚請馬上用水沖洗。

試劑盒應(yīng)在 4–8℃保存，在使用前試劑盒內(nèi)的所有試劑都要回溫到室溫(20-25℃)在有效期內(nèi)試劑可以一直使用

酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。將標(biāo)準(zhǔn)、樣品提取物和三聚氰胺酶標(biāo)記物加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉微孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。在用稀釋的洗液清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育20分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

我們已經(jīng)對可能出現(xiàn)在檢測樣品中的很多有機(jī)和無機(jī)物做了檢測，發(fā)現(xiàn)它們不和這個試劑盒發(fā)生交叉反應(yīng)。然而在樣品中也有一些易變質(zhì)的化合物，它們通過基質(zhì)影響來干擾測定，如含脂肪的食品，它們在測定前要通過稀釋來消除一些基質(zhì)影響。在使用的過程中出現(xiàn)失誤也會影響結(jié)果，例如試劑盒存儲的條件、吸取液體的程序、吸取液體的不準(zhǔn)確、在發(fā)生免疫和底物反應(yīng)的過程中孵育時間不準(zhǔn)確。

敏感性：三聚氰胺檢測限10 μg/L，B/B₀為50%時的值為150 μg/L，測定結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間是最精確的。

標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)(CVs)  <10%; 樣品的變異系數(shù)（CVs）<15%.

 

 

1、真空包裝微孔板（8×12條），包被有三聚氰胺多克隆抗體

2、6瓶三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為0、20、50、100、200、500ng/mL(ppb)

3、1瓶7mL 三聚氰胺酶標(biāo)記物

4、5×濃縮洗液 100ml ；使用前需要使用蒸餾水以1：5的比例稀釋

5、1瓶14mL底物（TMB）

6、1 瓶14mL終止液.(注意:鹽酸,勿接觸皮膚!).

微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍，在做同一次測試時要使用同一個盒子里的試劑和標(biāo)準(zhǔn)。

1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。

3、標(biāo)準(zhǔn)液，酶結(jié)合物，底物，終止液不用稀釋直接使用。

4、洗液在使用前要以1：5的比例稀釋后使用（比如：10ml洗液+40ml的蒸餾水）。

5、由于終止液中包含鹽酸拿的時候要小心。

1、在對應(yīng)的微孔中加入100 μL 標(biāo)準(zhǔn)或樣品。最好做重復(fù)。

2、用排槍在每個孔中都加入50μL酶標(biāo)記物、然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。

3、在室溫下孵育30分。

4、將孔里的液體倒入合適的容器中，每個微孔至少加入250μL、1×洗液，然后棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

5、使用排槍在每個孔中加入100μL底物顯色液，在室溫孵育20分。盡量使其不見光。

6、每孔加入100μL終止液，板中顏色將會由藍(lán)色變?yōu)樽攸S色。

7、450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。

可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來評價ELISA結(jié)果。也可以通過計算每個標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、三聚氰胺濃度為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算。當(dāng)樣品中的三聚氰胺濃度高于標(biāo)準(zhǔn)5（500μg/L）時，需要稀釋后重新再測定來獲得更精確的結(jié)果。

半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的三聚氰胺含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的三聚氰胺含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。

1、50μL ～200μL 單道或多道移液器和吸頭

2、微孔板洗滌機(jī)

3、振蕩器

4、蒸餾水或去離子水

5、吸水紙

6、離心機(jī)

7、450nm 濾光片的酶標(biāo)儀