技術(shù)原理：
KingFisher系列產(chǎn)品是適于分離DNA/RNA、蛋白和細(xì)胞的全自動(dòng)提取純化系統(tǒng)，專為解決客戶現(xiàn)在和未來的所有純化問題而設(shè)計(jì)。創(chuàng)新的產(chǎn)品基于專利的KingFisher技術(shù)(專利號(hào)US 6447729, US 6448092)，通過特制的磁棒吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠，從而實(shí)現(xiàn)磁珠/樣品的轉(zhuǎn)移，避免了液體處理過程，提高了自動(dòng)化程度。KingFisher技術(shù)的工作原理如下圖所示，樣品、溶液和磁珠置于微孔板或管中，磁棒表面套有專門的磁套用于保護(hù)磁棒避免與樣品/溶液/磁珠直接接觸。

kingfisher技術(shù)原理圖

磁珠的分類：
KingFisher技術(shù)所采用的磁珠粒徑在0.5-10μm之間，其內(nèi)核是鐵氧體(Ferrite-based)，表面覆蓋高分子惰性材料，如苯乙烯、瓊脂糖等。與經(jīng)典的層析介質(zhì)相比，磁珠的粒徑比常規(guī)的介質(zhì)粒徑(40μm)小，因而具有更大的比表面積，而某些具有超順磁性(Superparamagnetic)的磁珠具有更好的懸浮性能和分散性。

根據(jù)不同的表面處理與標(biāo)記，可將磁珠分成各種不同的應(yīng)用類型：

TiO2磷酸化多肽富集磁珠
磁珠表面覆蓋有一層TiO2材料，可以選擇性的與磷酸化的氨基酸殘基：絲氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、蘇氨酸(Thr)結(jié)合，而與酸性的氨基酸殘基的非特異性結(jié)合最小。與傳統(tǒng)的IMAC技術(shù)相比，其靈敏度提高了1000倍，富集后磷酸化蛋白的質(zhì)譜檢出限達(dá)100 fmol。

谷胱甘肽(GSH)磁珠
該磁珠表面包被有瓊脂糖，并偶聯(lián)有谷胱甘肽，可以特異性的與谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)結(jié)合，因而可用于純化帶有GST標(biāo)簽的重組蛋白。TALON™磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co離子的固定化金屬離子親和技術(shù)(IMAC)，可用于純化帶有組氨酸標(biāo)簽(6xHis)的重組蛋白。

Protein A和Protein G磁珠
帶有Protein A或Protein G基團(tuán)的磁珠，可廣泛應(yīng)用于IgG的純化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。

硅質(zhì)膜磁珠
這是一類最早出現(xiàn)的產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于DNA、RNA的純化。其原理類似于使用硅質(zhì)膜的離心柱，磁珠在高鹽條件下與核酸結(jié)合，而在低鹽環(huán)境下被洗脫，可用于全血、組織、細(xì)菌、病毒、植物等的核酸純化。

反相RPC磁珠
類似于反向?qū)游龅脑�理，可用于多肽的分離純化。Jimenez等使用KingFisher96和Dynabead® RPC 18磁珠僅需20min就可以平行處理96個(gè)樣品，用于與疾病相關(guān)的血清中肽段表達(dá)譜的研究。

ChargeSwitch®磁珠
ChargeSwitch磁珠的原理類似于離子交換技術(shù)，磁珠在pH < 6.5的緩沖液中帶正電，可與帶負(fù)電的核酸結(jié)合；在pH> 8.5的緩沖液中磁珠帶負(fù)電，使得之前吸附的核酸從磁珠上釋放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平臺(tái)上完美使用。

技術(shù)應(yīng)用：

基因組學(xué)
KingFisher磁珠提取純化平臺(tái)，非常適合于基因組學(xué)的研究。無論提取樣本的來源是微生物、動(dòng)物、植物或是病毒，KingFisher都可以快速的純化出足夠數(shù)量的DNA或RNA。高質(zhì)量的結(jié)果可以滿足下游應(yīng)用(如熒光定量PCR)的需要。

畜牧獸醫(yī)、CDC的應(yīng)用
使用專門的KingFisher試劑盒，可高效、高靈敏度地提取禽流感病毒(Avian influenza virus)、新城疫病毒(Newcastledisease virus)、牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrheavirus)、立克次體(Coxiella burnetii)等。KingFisher結(jié)合Ambion的MagMAX-96 AI/ND病毒RNA提取試劑盒，應(yīng)用于禽流感病毒的檢測(cè)，是獲得美國農(nóng)業(yè)部(USDA)認(rèn)可的高通量方法。提取得到的RNA可以通過ABI公司的Infleuenza A/H5 Kit檢測(cè)是否含有禽流感病毒，并進(jìn)一步確認(rèn)是否是備受關(guān)注的H5亞型。

食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用
經(jīng)過特殊處理的Dynal免疫磁珠可以快速的從食品樣品、環(huán)境中富集致病菌，如沙門氏菌(Salmonella)、李斯特菌(Listeria)、軍團(tuán)菌(Legionella)、大腸桿菌O157(E. coli O157)、賈地鞭毛蟲(Giardia cysts)和隱孢子蟲 (Cryptosporidium oocysts)等。采用磁珠純化技術(shù)可以有效的富集樣品中的微生物，減少背景干擾從而提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，該方法已獲美國環(huán)保署(EPA)和美國官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(AOAC)的認(rèn)可。

食品中O157，沙門氏菌，單增李斯特菌免疫磁珠檢測(cè)流程（數(shù)據(jù)來源于上海浦東疾控）

臨床樣品的分子診斷
KingFisher可快速高通量的處理臨床樣品，提純的核酸可用于后續(xù)的分子診斷，如使用氟尿嘧啶(Fluorouracil, 5-FU)治療癌癥患者前需檢測(cè)人DPYP基因突變。KingFisher提供了一種高效、高靈敏度的從患者全血中純化核酸的方案，為DPYP基因的篩查設(shè)定了標(biāo)準(zhǔn)。KingFisher同樣適合于福爾馬林固定石蠟包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)的組織樣品。

法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用
對(duì)于法醫(yī)工作而言，核酸提取的效率和穩(wěn)定性都是十分重要的。KingFisher與專門的法醫(yī)樣品核酸提取磁珠試劑配合使用，可從不同來源的材料中純化高質(zhì)量的DNA，包括干血、毛發(fā)、煙嘴等，最大處理量可達(dá)96個(gè)樣品/每次。

分離特定的細(xì)胞
通過標(biāo)記特殊抗體的磁珠，KingFisher可以用于分離特定的細(xì)胞，如CD34、CD3、CD4等。



快速純化蛋白
即使是脆弱的蛋白復(fù)合體KingFisher可用于純化各種蛋白，從重組蛋白到治療用抗體，可以使用各種宿主細(xì)胞，如動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母、細(xì)菌或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物/植物等，常規(guī)地純化抗體/抗原、藥物和疫苗。特別的，KingFisher技術(shù)是最溫和的純化方法，即使常規(guī)柱純化技術(shù)難以得到的復(fù)雜而精巧的蛋白復(fù)合體，也可以通過KingFisher磁珠提取分離技術(shù)完整的純化得到。

血清中肽段表達(dá)譜研究與生物標(biāo)志物篩選
基于磁珠的色譜分離技術(shù)，可以讓你以一種簡(jiǎn)單、有效和可重復(fù)的方式每天處理上百的樣品。采用基于疏水相互作用的反相RPC磁珠(Reverse Phase Chromatography)可以從血清樣品中結(jié)合多肽片段，經(jīng)乙氰洗脫，即可獲得高質(zhì)量的肽段表達(dá)譜。通過比較不同條件下肽段表達(dá)圖譜的差異，尋找潛在的可能血清生物標(biāo)志物(Biomarker)。

加速噬菌體展示文庫的淘洗進(jìn)程
與傳統(tǒng)基于固相微孔板的技術(shù)相比，KingFisher技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于：提供了懸浮式的磁珠，巨大的比表面積可以進(jìn)行更有效的淘洗(Panning)；轉(zhuǎn)移樣品而非液體的方法，使得清洗過程變得非常的簡(jiǎn)單。全自動(dòng)的方法易于提升通量，從而顯著提高噬菌體展示技術(shù)的效率。

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