艾狄斯25羥基維生素D酶 聯(lián)免疫檢測試劑盒 |
要點(diǎn)和解釋 |
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檢測前將所有試劑平衡至室溫,小心混勻。
按照“試劑準(zhǔn)備”中所述,復(fù)溶或準(zhǔn)備相關(guān)試劑。
1. 準(zhǔn)備已作標(biāo)記的玻璃試管或聚丙烯管用以標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本的稀釋。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本各取25μl分別加入到相應(yīng)標(biāo)記的試管。
3. 所有試管都再加入1ml的25D生物素。用漩渦混合器混合10秒。
4. 各取200μl已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或樣本分別加入已包被抗體的相應(yīng)酶標(biāo)板微孔內(nèi),做雙孔。用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育2小時(shí)。
5. 用稀釋好的洗液洗板3次。
a) 自動(dòng)洗板:設(shè)置洗板機(jī)分配每孔至少300μl洗液。注滿后抽空,如此循環(huán)3次。
b) 手動(dòng)洗板:迅速顛倒倒出孔內(nèi)物。每孔加入250μl洗液。再重復(fù)洗板2次。
在進(jìn)入下一步之前,于吸水紙上用力拍打倒置的板以除去多余的洗液 。
6. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入200μl酶結(jié)合物。用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育30分鐘。
7. 重復(fù)步驟5。
8. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入200μl TMB底物,用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育30分鐘。
9. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入100μ終止液。
10. 加入終止液后的30分鐘內(nèi)在酶標(biāo)儀450nm(參考650nm)波長處測量吸光度。
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